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上海金穗生物科技有限公司

2012 12-26

制備用于抗原上選擇的噬菌體抗體

轉(zhuǎn)化后,就得到了菌苔形式的抗體文庫(kù)。可以制備成甘油儲(chǔ)存物保存于一80℃。這是一個(gè)原始文庫(kù),象征著具有*價(jià)值的資源。的抗體文庫(kù)也是由這種原始文庫(kù)制備而來的。然而,當(dāng)用大培養(yǎng)板鋪板擴(kuò)增原始文庫(kù)時(shí),會(huì)造成部...

2012 12-26

文庫(kù)甘油儲(chǔ)存料中制備噬菌體抗體

1.取適當(dāng)數(shù)量(參見上述討論)的甘油文庫(kù)儲(chǔ)存料接種到含有250m12×TY/amp/glu的2L培養(yǎng)錐形瓶中。培養(yǎng)基的A600值應(yīng)小于0.05。從每個(gè)培養(yǎng)瓶中取1ul鋪板確定起始接種物的細(xì)菌量。2.在...

2012 12-24

在固相抗原上選擇噬菌體抗體

1.用溶于PBS的2m1抗原(10—1000ug/m1)包被免疫管,室溫過夜。碳酸鹽緩沖液也可使用。2.用PBS洗滌試管3次,并用2%MPBS封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn),放在旋轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)臺(tái)上,37℃l小時(shí)。3....

2012 12-24

用可溶性*化抗原進(jìn)行選擇

液相法可以解決直接包被于固相表面的抗原構(gòu)象可能發(fā)生改變的問題。此外,這個(gè)方法也使以結(jié)合性親和力使基礎(chǔ)的選擇更加簡(jiǎn)單,因?yàn)檎故径鄠€(gè)抗體的噬菌體并無選擇優(yōu)勢(shì)。液相法也易于控制抗原的濃度,這也有利于選擇到有...

2012 12-21

利用血清篩選噬菌體文庫(kù)交叉抑制實(shí)驗(yàn)

1.將100ul含有2×1010個(gè)PEG—純化噬菌體顆粒的TBS,等量分加到多孔板各孔中,4℃孵育12小時(shí)。2.用PBST洗滌數(shù)次,在室溫下每孔加250/ll封閉液封閉2小時(shí)。3.用封閉液稀釋血清,其...

2012 12-21

利用血清篩選噬菌體文庫(kù)PCR擴(kuò)增的模板

1.用無菌塑料吸嘴挑取一個(gè)AmpR噬菌粒菌落(直徑大約lmm)并將其轉(zhuǎn)入到0.2mlMicroAmp反應(yīng)管中,內(nèi)含20u1洗脫緩沖液。在GeneAmp9600PCR儀中,95℃加熱樣本10分鐘(避免用...

2012 12-19

噬菌體展示文庫(kù)fUSE5活體篩選特殊步驟

1.為了洗脫細(xì)菌,將900ul的K91KanTerrific肉湯菌液加入裂解后的細(xì)胞,并于室溫下孵育20分鐘。2.將步驟1所得全部倒入含有9m1四環(huán)素濃度為0.2ug/ml的NZY培養(yǎng)基的50m1錐形...

2012 12-19

噬菌體展示文庫(kù)活體篩選的通用步驟

1.通過腹腔注射濃度為1.25%(w/v)的阿佛丁來麻醉小鼠,劑量為每克體重注射15ul的阿佛丁。開始時(shí)用*注射300ul。用右手抓住一只小鼠尾部的并提起,使其后腿離地。然后用左手抓住鼠的頭和頸的后部...

2012 12-17

構(gòu)建pⅧ噬菌粒庫(kù):擴(kuò)增與儲(chǔ)存

A.輔助噬菌體感染和pⅧ誘導(dǎo)產(chǎn)生1.按10:1感染重?cái)?shù)加入VSC-M13輔助噬菌體[約1012空斑形成單位(pfu)]到100ml已轉(zhuǎn)化的細(xì)菌中(見實(shí)驗(yàn)方案6.3)。于37℃靜置孵育30分鐘。2.將上...

2012 12-17

連接插入片段與BstⅪ消化的p8V5載體

A.連接反應(yīng)1.在13m1離心管中混合下列物質(zhì):●20/igp8V5載體(經(jīng)BstⅪ酶切和純化)●1.25ug插入DNA片段(經(jīng)BstⅪ、BsiHKAI酶切和純化)●200ul10×連接緩沖液●4ul...

2012 12-14

感受態(tài)大腸桿菌SS320的制備

1.從新鮮(時(shí)間不超過1周)的2YT/tet平板上挑取單個(gè)大腸桿菌SS320的克隆,接種到lml2YT/tet培養(yǎng)基中。37℃200r/min孵育6~8小時(shí)。轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基到含有50m12YT/tet培養(yǎng)...

2012 12-14

噬菌體展示文庫(kù)的再增殖

1,用一系列稀釋液感染大腸桿菌XLl-Blue(OD600=0.5~1.0),并涂布在用于噬菌粒篩選的適當(dāng)培養(yǎng)基上,以測(cè)定噬菌體文庫(kù)儲(chǔ)液的感染性滴度(infectivitytitre)。這個(gè)滴度取決于...

2012 12-12

科學(xué)家發(fā)現(xiàn)基因小差異造成高矮有別

據(jù)《科學(xué)時(shí)報(bào)》報(bào)道姚明為何能長(zhǎng)那么高?原因很可能在于基因的不同。英國(guó)科學(xué)家近日發(fā)現(xiàn)了一種對(duì)人類身高有決定性作用的基因,在其他條件不變的情況下,這種基因遺傳密碼只要有微小的變化,就可以促進(jìn)身高增長(zhǎng)一厘米...

2012 12-12

咖啡加運(yùn)動(dòng)可以有效降低皮膚癌的患病率

據(jù)《*》報(bào)道咖啡是許多人生活中*的飲品,其主要成分咖啡陰能夠幫助人們時(shí)刻保持充沛精力。但是科學(xué)家們近日發(fā)現(xiàn),除了這一功效外,喝咖啡加上經(jīng)常運(yùn)動(dòng)可以有效降低皮膚癌的患病率。長(zhǎng)時(shí)間的紫外線照射會(huì)傷害到人體...

2012 12-10

免疫印跡技術(shù)概述

免疫印跡從早期用抗體直接“著染”聚丙烯酰胺凝膠內(nèi)的蛋白(Burridge1976;Showe等1976)發(fā)展為使用多樣化復(fù)制技術(shù)的方法。例如,將分離的多肽轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜,化學(xué)活化的濾紙條或尼龍膜上...

2012 12-7

曬黑也跟抗癌蛋白質(zhì)[p53]有著很密切的關(guān)系

當(dāng)皮膚受到紫外光(ultravioletlight;uvlight)照射時(shí),稱為角朊細(xì)胞(kerotinocyte)的皮膚細(xì)胞會(huì)開始分泌黑細(xì)胞促素(melanocyte-stimulatinghorm...

2012 12-7

胚胎干細(xì)胞首度被證明可以治愈癱瘓老鼠

當(dāng)你在閱讀這篇報(bào)導(dǎo)時(shí),在世界的某個(gè)角落可能就正發(fā)生不幸的車禍,造成受害者終生癱瘓而無法再行走?;蛘叽藭r(shí)此刻,在某個(gè)醫(yī)院診療室的神經(jīng)科醫(yī)師,正無力回天地對(duì)病人宣判他們可能罹患多發(fā)性硬化癥或肌萎縮性脊髓側(cè)...

2012 12-5

制備單克隆抗體動(dòng)物的選擇與免疫

1.動(dòng)物的選擇純種BALB/C小鼠較溫順,離窩的活動(dòng)范圍小,體弱,食量及排污較小,一般環(huán)境潔凈的實(shí)驗(yàn)室均能飼養(yǎng)成活。目前開展雜交瘤技術(shù)的實(shí)驗(yàn)室多選用純種BALB/C小鼠。2.免疫方案免疫方案應(yīng)根據(jù)抗原...

2012 12-5

放射免疫分析及其在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中應(yīng)用

放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)是以放射性核素為標(biāo)記物的標(biāo)記免疫分析法。于1960年由美國(guó)學(xué)者Yalow和Berson創(chuàng)立,并首先用于糖尿病患者血漿胰島素含量的測(cè)定。這是醫(yī)學(xué)和...

2012 12-1

熱穩(wěn)定腸毒素(ST)的快速檢測(cè)

(1)ELISA檢測(cè)STDe.Mai等(1983)以過氧化物酶標(biāo)記抗體,用抗原競(jìng)爭(zhēng)間接法檢測(cè)培養(yǎng)液中STl。定性檢測(cè)時(shí)底物用5—氨基水楊酸,定量時(shí)用鄰苯二胺。此法與乳鼠試驗(yàn)的相符率為96.7%,無假陽...

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