免疫印跡從早期用抗體直接“著染”聚丙烯酰胺凝膠內(nèi)的蛋白（Burridge 1976；Showe等1976）發(fā)展為使用多樣化復(fù)制技術(shù)的方法。例如，將分離的多肽轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜，化學(xué)活化的濾紙條或尼龍膜上（Gershoni和Paladel983；Towbin和Gordon1984；Beisiegell986）。在上述基礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)多次改進(jìn)，zui常用和zui簡(jiǎn)便的方法是使用電轉(zhuǎn)移將分離的蛋白印跡在硝酸纖維素膜上（Towbin等1979；Burnet981）。

1．抗原樣品的制備；
幾乎任何蛋白質(zhì)都可用于免疫印跡。將蛋白質(zhì)與標(biāo)準(zhǔn)的樣品緩沖液混合，經(jīng)凝膠電泳分離后再用于免疫印跡。常用的樣品有純化或部分純化的制備液，細(xì)胞粗提液或免疫沉淀樣品。
免疫印跡的優(yōu)勢(shì)是可分析不能用其他免疫化學(xué)技術(shù)進(jìn)行研究的蛋白質(zhì)樣品。例如，不能標(biāo)記的蛋白質(zhì)或不溶于溫和抽提緩沖液的蛋白質(zhì)等。免疫印跡還可分析組織、器官或整個(gè)微生物等來(lái)源的粗制樣品。
zui常用的樣品來(lái)源有3個(gè)途徑：蛋白質(zhì)溶液、細(xì)胞裂解液和免疫沉淀蛋白，將在下面分別介紹。但是任何來(lái)源的蛋白質(zhì)經(jīng)適當(dāng)處理后都可用于免疫印跡。

2．凝膠電泳分離樣品；
3．分離的多肽轉(zhuǎn)移至膜載體上；
4．印跡膜總蛋白的染色（根據(jù)需要）
5．抗原的檢測(cè)。

蛋白質(zhì)溶液，通常是細(xì)胞或組織的抽提液，用凝膠電泳的樣品緩沖液來(lái)配制，蛋白質(zhì)經(jīng)凝膠電泳分離后轉(zhuǎn)移至可非特異性結(jié)合各種蛋白的膜上。將膜直接與凝膠接觸，然后置于電場(chǎng)中使蛋白質(zhì)從凝膠印跡轉(zhuǎn)移至膜上。在某些情況下，可將印跡膜染色檢測(cè)印跡蛋白的位置，膜上未結(jié)合的位點(diǎn)要進(jìn)行封閉以去除剩余的反應(yīng)位點(diǎn)。zui后是確定特異性抗原的位置，通常是先使用未標(biāo)記的一抗，然后使用標(biāo)記的二抗。

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