金屬硫蛋白（metallothionein）是由由微生物和植物產(chǎn)生的金屬結(jié)合蛋白，富含半*的短肽，對(duì)多種重金屬有高度親和性。它是分子質(zhì)量較低，半*殘基和金屬含量*的蛋白質(zhì)。與其結(jié)合的金屬主要是鎘、銅和鋅，廣泛地存在于從微生物到人類(lèi)各種生物中，其結(jié)構(gòu)高度保守。

對(duì)于金屬硫蛋白的研究,國(guó)內(nèi)外主要集中在提取、檢測(cè)以及應(yīng)用上。由于在實(shí)際生產(chǎn)中,主要采用層析法,分離純化后的金屬硫蛋白中還含有其它的雜蛋白,因此本文作者正在進(jìn)行金屬硫蛋白的分子印跡聚合物的研究,使其更好地應(yīng)用于金屬硫蛋白的純化。

金屬硫蛋白在生物進(jìn)化中高度保守，有四種異構(gòu)體，MT-Ⅰ和MT-Ⅱ在大多數(shù)哺乳動(dòng)物的內(nèi)臟器官中廣泛存在，尤以肝、腎細(xì)胞為主，而且參加其功能調(diào)節(jié)。MT-Ⅲ分布主要限于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，主要分布于星性膠質(zhì)細(xì)胞（集中于細(xì)胞體和突起中），其次為神經(jīng)元細(xì)胞，也有報(bào)道稱(chēng)少量分布于生殖細(xì)胞、小腸、胃、腎和嗅覺(jué)皮質(zhì)細(xì)胞中。MT-Ⅳ主要分布于皮膚、舌、消化道等器官的角質(zhì)細(xì)胞和復(fù)層鱗狀上皮細(xì)胞中。

以下為金屬硫蛋白的提取方法介紹：

1、主要試劑：三羥甲基氨基甲烷（簡(jiǎn)稱(chēng)Tris）；5，5-二硫二（2-硝基苯甲酸）（簡(jiǎn)稱(chēng)DTNB）；PBS緩沖溶液。

2、動(dòng)物的處理：參考Onsaka等的方法，給家兔皮下注射ZnSO44次，第1天注射60mg/只（約15mg Zn/kg），第2、4天注射90mg/只，第7天注射120mg/只，第8天處死動(dòng)物取其內(nèi)臟。

3、粗制品的制備：

1）稱(chēng)重：將前一夜放-4℃冰箱中解凍的試樣拿出來(lái)用托盤(pán)天平稱(chēng)重，試樣重量M，到0.1g；

2）攪碎：將試樣用剪刀剪成碎片后，用搗碎機(jī)搗約30～50s，搗成勻漿；

3）提?。杭尤胂喈?dāng)于試樣重量?jī)杀扼w積的0.02MTris-HCl，用磁力攪拌器攪約半分鐘；

4）變性：加入等體積氯仿：乙醇（0.08：1）變性除雜蛋白，攪拌約5分鐘；

5）離心：5000rmp、4℃離心25min，棄沉淀，取上清；

6）熱變性：75℃熱變性3～5min除雜蛋白；

7）過(guò)濾：用冰塊速冷后用8層紗布過(guò)濾，取清液，靜置約2h；

8）離心：8000rmp、4℃離心25min，棄沉淀，取上清，得到勻漿液；

9）層析、凍干：對(duì)勻漿液進(jìn)行層析，然后收集富含MT的層析液進(jìn)行凍干即得MT粗品。