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Ex?(nm)	757	Em?(nm)	779

Live或Dead 可固定死細(xì)胞染色試劑盒 NIR熒光是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的染色細(xì)胞的試劑盒，我們的Live or Dead™ Fixable Dead Cell Staining Kit *NIR Fluorescence*是一套用于標(biāo)記細(xì)胞的工具，用于細(xì)胞功能的熒光顯微鏡研究。細(xì)胞的有效標(biāo)記為在空間和時間背景下研究細(xì)胞事件提供了有利的方法。這個特殊的試劑盒設(shè)計用紅外熒光均勻標(biāo)記固定的哺乳動物細(xì)胞，用于紅色激光激發(fā)的流式細(xì)胞儀應(yīng)用。該試劑盒使用專有的紅色熒光染料，在與細(xì)胞成分結(jié)合后更加熒光。試劑盒中使用的熒光染料被激發(fā)，其中紅色（635nm）在775nm處具有熒光（APC / CY7通道）。該試劑盒提供所有必需組件和優(yōu)化的細(xì)胞標(biāo)記協(xié)議。它是保存特定細(xì)胞熒光圖像的優(yōu)秀工具，也可用于熒光流式細(xì)胞儀應(yīng)用。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的Live或Dead 可固定死細(xì)胞染色試劑盒 。

實(shí)驗方案

染色樣品示例

概述

1.用HHBS制備樣品（0.5 mL /分析）
2.替換為HHBS
3.將Stain It™NIR熒光添加到細(xì)胞懸浮液中
4.在室溫或37°C下染色細(xì)胞20-60分鐘
5.洗凈細(xì)胞
6.固定細(xì)胞（可選）
7.使用適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)/發(fā)射濾光片，用流式細(xì)胞儀和/或熒光顯微鏡檢查樣品

注意：在開始實(shí)驗之前，在室溫下解凍所有組分

操作步驟

在沒有額外說明的情況下，所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

表1.用于流式細(xì)胞術(shù)分析的熒光光譜特性和激發(fā)光

貨號	描述	Ex(nm)	Em(nm)	激發(fā)光源（nm）
22500	藍(lán)色熒光，405nm激發(fā)	410	450	405
22501	綠色熒光，405nm激發(fā)	408	512	405
22502	橙色熒光，405nm激發(fā)	398	550	405
22599	紅色熒光優(yōu)化用于流式細(xì)胞術(shù)	523	617	488
22600	藍(lán)色熒光	353	442	335
22601	綠色熒光	498	521	488
22602	橙色熒光	547	573	561或488
22603	紅色熒光	583	603	561
22604	深紅色熒光	649	660	633
22605	近紅外熒光	749	775	633

1.使用1X Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的無疊D化鈉和無血清/蛋白質(zhì)的緩沖液制備細(xì)胞。

2.用HHBS或您選擇的無疊氮化物和無血清/蛋白質(zhì)的緩沖液洗滌細(xì)胞一次。

3.以5-10×106 / mL的濃度在HHBS或您選擇的無疊氮化物和無血清/蛋白質(zhì)的緩沖液中重懸細(xì)胞。

4.將1 µL 500X Stain It NIR熒光儲備液添加到0.5 mL細(xì)胞/測定中，并充分混合。

5.在室溫或37°C，5％CO2的培養(yǎng)箱中避光保存20-60分鐘。注意：應(yīng)根據(jù)不同細(xì)胞系實(shí)驗確定的染色濃度和孵育時間。

6.洗滌細(xì)胞兩次，然后用HHBS或您選擇的緩沖液重懸細(xì)胞。

7.根據(jù)需要固定細(xì)胞（可選）。

8.使用適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)/發(fā)射濾光片，使用流式細(xì)胞儀和/或熒光顯微鏡分析細(xì)胞（參見表1）。

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