樣品實驗方案

簡要概述

1. 用5×105至1×106細胞/ mL的密度制備含測試化合物的細胞

2. 將1 µL 500X Nuclear Red CCS2添加到0.5 mL細胞溶液中

3. 在37°C，5％CO2下孵育10-30分鐘

4. 使用帶有PE-Texas Red通道的流式細胞儀分析細胞（Ex / Em = 488 nm / 615 nm）

實驗步驟

1.對于每個樣品，以0.5×105至1×106細胞/ mL的密度在0.5 mL溫暖的培養(yǎng)基或自備緩沖液中制備細胞。注意：應(yīng)單獨評估每個細胞系，以確定細胞密度。

2.用測試化合物處理細胞一段時間，以誘導(dǎo)細胞凋亡，細胞周期停滯或其他細胞周期功能。

3.在含有生長培養(yǎng)基的細胞中加入1 µL 500X Nuclear Red CCS2（組分A）。

4.將細胞在37°C，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育10至30分鐘。注意：對于貼壁細胞，用0.5 mM EDTA輕輕提起細胞以保持細胞完整，并在用Nuclear Red CCS2孵育之前用含血清的培養(yǎng)基洗滌一次。合適的孵育時間取決于所用的單個細胞類型和細胞濃度。優(yōu)化每個實驗的孵育時間。染色前無需固定細胞，因為Nuclear Red CCS2具有細胞滲透性。

5.可選：將細胞以1000 rpm的速度離心4分鐘，然后將細胞重懸于0.5 mL的測定緩沖液（組分B）或自備的緩沖液中。

6.使用帶有PE-Texas Red通道（Ex / Em = 488/615 nm）的流式細胞儀檢測熒光強度。