樣品實驗方案

簡要概述

1.準備20X馬來酰亞胺反應混合物（260μL）
2.在室溫下孵育30-60分鐘
3.準備馬來酰亞胺工作溶液（50μL）
4.添加N-乙基馬來酰亞胺標準品或測試樣品（50μL）
5.在室溫下孵育5至30分鐘
6.監(jiān)測Ex / Em = 490/525 nm處的熒光增加（截止= 515 nm）

溶液配制

1.儲備溶液配制

所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。 避免反復凍融循環(huán)。
1.1馬來酰亞胺Green 原液（500X）：
將20μLDMSO（組分E）加入到馬來酰亞胺Green（組分A）的小瓶中以制備500X馬來酰亞胺Green 儲備溶液。 注意：10μL的500X馬來酰亞胺Green 原液足以容納一個96孔板。

2.標準溶液配制

點擊查看N-乙基酰亞胺標準溶液配制方案
將10μL10mM（10nmol /μL）N-乙基馬來酰亞胺標準品（組分D）加入990μL測定緩沖液（組分C）中以產(chǎn)生100μM（100pmol /μL）N-乙基馬來酰亞胺標準溶液（MS7）。 取100μM（10pmol /μL）N-乙基酰亞胺標準溶液（MS7）并進行1：3連續(xù)稀釋，得到用測定緩沖液（組分C）連續(xù)稀釋的N-乙基馬來酰亞胺標準品（MS6-MS1）。

3.工作溶液配制

3.1將10μL500X馬來酰亞胺Green 儲備溶液加入250μL反應緩沖液（組分B）中并充分混合以制備20X馬來酰亞胺反應混合物。 在室溫下孵育20X馬來酰亞胺反應混合物至少30分鐘，避光。 注意：將20X馬來酰亞胺反應混合物孵育至少30分鐘以使信號與背景比大化非常重要。 注意：將500X馬來酰亞胺Green 儲備液加入反應緩沖液（組分B）后，溶液呈黃色。

3.2將整瓶20X馬來酰亞胺反應混合物加入5mL測定緩沖液（組分C）中并充分混合以制備馬來酰亞胺工作溶液。 注意：此馬來酰亞胺工作溶液不穩(wěn)定，隨用隨配。