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Amplite 熒光法丙an酸轉(zhuǎn)氨酶檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測丙an酸的試劑盒，丙an酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT），也稱為血清谷an酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶（GPT），是轉(zhuǎn)移酶家族的成員。它催化丙an酸和谷an酸之間α-氨基的可逆轉(zhuǎn)移，是氨基酸代謝中的重要酶。 ALT主要存在于肝臟中，少量存在于心臟，肌肉和腎臟中。在健康受試者中，血清ALT水平低。然而，當(dāng)細(xì)胞受損時(shí)，例如急性和慢性肝炎，阻塞性黃疸，肝癌，心肌梗塞，ALT可能會滲入血流并且ALT水平顯著升高。因此，測定血清ALT水平具有重要的臨床和診斷意義。 Amplite 熒光丙an酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒為各種生物樣品中的ALT測量提供了一種快速而靈敏的方法。 ALT催化丙an酸和α-酮戊二酸與丙酮酸和谷an酸的反應(yīng)。通過酶偶聯(lián)反應(yīng)循環(huán)產(chǎn)生紅色熒光產(chǎn)物來測量產(chǎn)物谷an酸。可以通過熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 530-570nm / 590-600nm（佳Ex / Em = 540nm / 590nm）下讀取信號。使用Amplite 熒光丙an酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒，在100μL反應(yīng)體積中檢測到低至4 mU / mL的ALT。該測定是穩(wěn)健的，并且可以容易地適用于各種各樣的應(yīng)用。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite 熒光法丙an酸轉(zhuǎn)氨酶檢測試劑盒。

實(shí)驗(yàn)方案

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

1.準(zhǔn)備ALT工作溶液（50 µL）
2.加入ALT標(biāo)準(zhǔn)液或測試樣品（50 µL）
3.在37°C下孵育30分鐘至60分鐘
4.監(jiān)測Ex / Em = 540/590 nm時(shí)的熒光增加

溶液制備

1.儲備溶液

所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 ALT標(biāo)準(zhǔn)溶液：
將100 µL DPBS加到ALT陽性對照（成分D）的小瓶中，制成100 U / mL ALT儲備液。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液

ALT標(biāo)準(zhǔn)
將10 µL 100 U / mL ALT標(biāo)準(zhǔn)溶液加到含0.1％BSA的990 µL DPBS緩沖液中，以生成1000 mU / mL ALT標(biāo)準(zhǔn)溶液（ALT7）。取1000 mU / mL ALT標(biāo)準(zhǔn)溶液并進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，以得到ALT標(biāo)準(zhǔn)品（ALT6-ALT1）的連續(xù)稀釋液。

3.工作溶液

3.1 NAD解決方案（100X）：
將100 µL ddH2O加入NAD小瓶（組分C）。

3.2 ALT酶混合物溶液：
將10 mL ALT分析緩沖液（組分B）添加到ALT酶混合物（組分A）瓶中，并充分混合。

3.3 ALT工作溶液：
將整個(gè)小瓶100X NAD溶液（從1）添加到ALT酶混合物溶液（從2）中，以得到ALT工作溶液。

注意：此ALT工作溶液足以容納兩個(gè)96孔板。它在室溫下不穩(wěn)定，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)及時(shí)使用，并避免暴露在光線下?；蛘?，可以通過將200μLH2O加入組分A的瓶子中制成50倍的ALT酶混合物儲備溶液，然后通過將儲備溶液與測定緩沖液（組分B）和100x NAD溶液按比例混合來制備ALT工作溶液。