2×SeamLess Mix

描述：

2XSuper Taq PCR Mix 是經(jīng)優(yōu)化的既用型 PCR 預(yù)混物，含有 Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑和穩(wěn)定劑，使用時(shí)只需加入模板、引物和滅菌水即可進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，大大簡(jiǎn)化了操作過(guò)程、提高了效率、減少了 PCR 操作過(guò)程中的人為誤差。具有快速簡(jiǎn)便、重復(fù)
性高、特異性好、靈敏度高和穩(wěn)定性好的特點(diǎn)。
該制品可應(yīng)用于常規(guī) PCR 擴(kuò)增和大規(guī)模基因檢測(cè)。該制品中已經(jīng)含有溴酚藍(lán)染料，PCR 擴(kuò)增完畢后可直接點(diǎn)樣于瓊脂糖凝膠，無(wú)需再加入 DNA Loading Buffer。 該制品擴(kuò)增得到的 PCR 產(chǎn)物的 3’端含有"A"尾巴，可直接連接入 pUC57 Simple TOPO克隆載體。
應(yīng)用：基因檢測(cè)、定點(diǎn)突變分析和 T-A 克隆。
儲(chǔ)存：長(zhǎng)期儲(chǔ)存置于-20°C 以下，可保存 2 年；短期使用置于 4°C（3 個(gè)月）保存。

使用方法
1. 按下表配制反應(yīng)體系并混合均勻：
2×Super Taq PCR Mix 25 μl
上游引物(10 μM) 2 μl
下游引物(10 μM) 2 μl

具體程序根據(jù)實(shí)際擴(kuò)增情況而定。
3. 電泳：1% 瓊脂糖凝膠電泳，上樣 5 μl，電泳結(jié)束在紫外燈下檢測(cè)條帶。

一、模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物，分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過(guò)程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂、DNA合成         等生物學(xué)過(guò)程，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴(kuò)增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；

六、酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)步驟，常常需要進(jìn)行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來(lái)判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時(shí)，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長(zhǎng)鏈甚至全長(zhǎng)mRNA的RT，對(duì)RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進(jìn)行RT反應(yīng)，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機(jī)引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機(jī)引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個(gè)gene表達(dá)量很低）。選擇隨機(jī)引物時(shí)，鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行特異性擴(kuò)增。同時(shí)要注意隨機(jī)引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量超過(guò)250ng，可能會(huì)導(dǎo)致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長(zhǎng)片段、全長(zhǎng)產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個(gè)基因序列的一部分，與模板互補(bǔ)的引物。該引物需要結(jié)合目標(biāo)RNA的已知序列進(jìn)行設(shè)計(jì)。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個(gè)目標(biāo)RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當(dāng)分析多種目標(biāo)時(shí)，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來(lái)就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對(duì)退火溫度進(jìn)行優(yōu)化。