平板涂布玻璃珠（無(wú)菌）

保存條件：室溫干燥保存
產(chǎn)品介紹：
平板涂布玻璃珠提供了一種高效快速的菌液（大腸桿菌、酵母菌液等）涂布方法。平板涂布玻璃珠（直徑4 mm）光滑均勻，無(wú)菌包裝，表面經(jīng)特殊工藝處理，不殘留菌液。與傳統(tǒng)方法比較，使用平板涂布玻璃珠，菌液涂布更加均勻，并能夠覆蓋傳統(tǒng)涂菌方法不能達(dá)到的平板邊緣。同時(shí)，可實(shí)現(xiàn)多板同時(shí)涂布，大大提高實(shí)驗(yàn)效率。平板涂布玻璃珠可經(jīng)反復(fù)滅菌，多次使用。
特點(diǎn)：
1. 均勻：菌液涂布均勻。
2. 高效：可實(shí)現(xiàn)多板同時(shí)涂布。
3. 經(jīng)濟(jì)：可反復(fù)滅菌，多次使用。
滅菌方法：
玻璃珠經(jīng)70%的乙醇洗滌后，高溫高壓滅菌，晾干后使用。
使用方法：
1. 向已加入菌液的固體瓊脂平板加入無(wú)菌玻璃珠數(shù)顆，如9 cm平板每板建議加10粒玻璃珠。
2. 蓋好板蓋，于超凈臺(tái)表面水平前后、左右各快速晃動(dòng)平板約10 sec，以達(dá)到更佳涂板效果。
注意：當(dāng)板蓋有冷凝水時(shí)，應(yīng)倒掉或晾干板蓋上的冷凝水，以防止涂板時(shí)污染平板。如需同時(shí)涂布多板，可將加有玻璃珠的平板疊在一起，同時(shí)晃動(dòng)涂板。
3. 待瓊脂表面菌液干燥時(shí)，倒出玻璃珠，蓋好板蓋，以備后續(xù)培養(yǎng)。
注意：平板涂布玻璃珠為無(wú)菌包裝，請(qǐng)?jiān)跓o(wú)菌環(huán)境下使用。玻璃珠可反復(fù)滅菌，多次使用。

一、模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物，分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂、DNA合成         等生物學(xué)過程，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴(kuò)增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；

六、酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)步驟，常常需要進(jìn)行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時(shí)，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長(zhǎng)鏈甚至全長(zhǎng)mRNA的RT，對(duì)RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進(jìn)行RT反應(yīng)，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機(jī)引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機(jī)引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個(gè)gene表達(dá)量很低）。選擇隨機(jī)引物時(shí)，鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行特異性擴(kuò)增。同時(shí)要注意隨機(jī)引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量超過250ng，可能會(huì)導(dǎo)致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長(zhǎng)片段、全長(zhǎng)產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個(gè)基因序列的一部分，與模板互補(bǔ)的引物。該引物需要結(jié)合目標(biāo)RNA的已知序列進(jìn)行設(shè)計(jì)。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個(gè)目標(biāo)RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當(dāng)分析多種目標(biāo)時(shí)，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對(duì)退火溫度進(jìn)行優(yōu)化。