由于磷酸化的化學(xué)計(jì)量比較低，因此磷酸肽的濃縮是成功進(jìn)行磷酸蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟。

PolyMAC 提供了一種有效的、大大改進(jìn)的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)更完整的磷酸肽的富集化。這種高度選擇性 的富集法可以用于大多數(shù)復(fù)雜樣品，因?yàn)樗峁┝说膶傩院突厥章省?/span> PolyMAC 是一種基于 聚合物的固定化金屬離子親和捕獲法，具有zhuoyue的磷酸化蛋白質(zhì)組覆蓋率和回收率。它是一種可  溶性納米聚合物，設(shè)計(jì)用于與溶液中的磷肽相互作用，隨后在固相載體上捕獲，用于洗滌和磷肽  洗脫。與常用的eryanghuatai和固定化金屬離子親和捕捉法相比， PolyMAC 具有更好的重現(xiàn)性和磷酸 化肽段的富集性，磷酸化肽段的選擇性接近95%,回收率>90%。重要的是，對(duì)于總蛋白磷酸化

水平較低的樣品， PolyMAC 具有非常好的回收率和選擇性

產(chǎn)品組分及儲(chǔ)存條件

操作步驟

1. 向酶解和脫鹽后的干燥樣品中加入200 μL 的 Loading Buffer 充分重懸樣品。

2.將 PolyMAC   Beads 充分渦旋(10-20 s)后取50μL 于1.5 mL 的離心管中，瞬離2-3 s,

然后去除上層儲(chǔ)存液。

3.將重懸后的樣品加入到含有 PolyMAC Beads 的離心管中，然后置于混勻儀中，26℃,

>1200 rpm, 劇烈搖晃25 min。

4.將樣品加入 PolyMAC-Tips  中，先20× g 離 心 2 min, 然后100× g 離 心 1min, 確保樣品溶

液從 Tips jianduan流出到離心管中。

5. 用200 μL Loading Buffer I 洗1次，先20 g 離心 2min, 然后100 g 離 心 1min, 棄濾液。 6.用200 μL Washing Buffer I 洗1次，先20g離心 2 min, 然后100g 離 心 1min, 棄濾液。

7.用200 μL Washing BufferII 洗1次，先20g離心 2 min, 然后100g 離 心 1min, 棄濾液。 8.將 Tips 放入新離心管中以收集洗脫的磷酸肽， Tips 中加入50 μL Elution  Buffer,20g 離心

2 min, 再加入50 μL Elution Buffer, 先 2 0g 離 心 2 min, 再以100 g 離 心 1min,收集濾液。

9.如果有任何溶液殘留在吸頭中，請(qǐng)用移液器將其推出收集管中，凍干后-80 C 保存待質(zhì)譜檢測(cè)

Washing buffer

Add the sample to the

PolyMac-Tips

Centrifuge

Elution buffer