產(chǎn)品簡介

細(xì)胞上清/尿液外泌體純化試劑盒（SEC）能夠快速高效地從細(xì)胞上清、尿液等樣本中提取純化外泌體，該試劑盒基于尺寸排阻色譜法原理，根據(jù)顆粒大小分離純化外泌體。本試劑盒提取后的外泌體可用于外泌體表征、外泌體功能驗(yàn)證、外泌體藥物遞送和外泌體標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)等研究。

產(chǎn)品組分及儲存條件

儲存條件：4 ℃     有效期1年

操作流程：

樣本預(yù)處理

1. 細(xì)胞上清

① 收集細(xì)胞上清10-50 mL(收集時細(xì)胞培養(yǎng)密度不低于1×10?cfu/mL);

② 細(xì)胞上清離心(3000 g、10 min),保留上清；

③ 上清液使用0.22 μm濾膜過濾；

④ 過濾后用100 kD超濾管進(jìn)行濃縮，濃縮體積比為1:20,收集濃縮液備用。

2. 尿液

① 采集中段晨尿約10-50 mL,離心(3000 g、10 min),保留上清；

② 上清液使用0.22 μm濾膜過濾；

③ 過濾后用100 kD超濾管濃縮，濃縮體積比為1:20；收集濃縮液備用。

外泌體分離

1. 試劑準(zhǔn)備

保存液(5×)和清洗液(5×)均需要用去離子水稀釋到1×，所用試劑需用0.22 μm濾膜過濾后再使用；

自備1×PBS，使用0.22 μm濾膜過濾后再使用或者采購已過膜的PBS（使用前需平衡到室溫）。

2. 柱平衡

① 從冰箱取出SEC純化柱，將其垂直固定（需自備固定裝置）；

② 置于室溫下放置30分鐘；

③ SEC純化柱下方放置一個空燒杯；

④ 打開頂部柱塞和底蓋，將管中保存液排空至底部出口無液體流出，向柱中加入15mL 1×PBS，可分次加，讓液體全部流出，再上樣。

3. 樣品上樣

① 取8個EP管，依次標(biāo)記為1，2，3，4，5，6，7，8；

② 將1 mL樣品從SEC純化柱頂部沿壁加入，樣品WANQUAN進(jìn)入填料并且底部出口無液體流出后，加入0.5 mL 1×PBS，使用EP管1收集流出液，收集體積為0.5 mL；

③ 待上一個0.5 mL 1×PBS全部進(jìn)入排阻柱內(nèi)后，再添加0.5 mL的1×PBS，使用EP管2收集流出液，收集體積為0.5 mL；

注意：使用時應(yīng)盡量保證柱內(nèi)有液體，以確保填料能夠被充分潤濕。

④ 重復(fù)③操作6次，總共收集8管洗脫液。

注意：1. 樣品最小體積不應(yīng)小于1 mL；樣品不足1 mL時，用1×PBS補(bǔ)到1 mL，混勻后再上樣。

4. 外泌體收集

① 若想獲得高回收率外泌體：保留3，4，5，6，7的餾分，共計(jì)2.5 mL；若不區(qū)分餾分，在第2個0.5 mL 1×PBS全部進(jìn)入排阻柱內(nèi)后，直接加入2.5 ml 1×PBS，洗脫至一個收集管中。

② 若想獲得高純度外泌體：將第4，5，6的餾分合并，共計(jì)1.5 mL。

注意： 如需濃縮外泌體洗脫液，可使用100 kDa超濾管，4000 g離心濃縮到目的體積即可。

5. SEC純化柱的清洗與儲存

收集結(jié)束后，加10 mL清洗液，接著用1×PBS沖洗15 mL，再用1×保存液沖洗10 mL。將底蓋關(guān)閉，用1×保存液填滿SEC純化柱，用柱塞封閉頂部端口并檢查無液體流出后，4 ℃保存。

注意：1. 該SEC純化柱可重復(fù)使用10次。

2. 使用結(jié)束后需要用封口膜將柱上端封死，避免保存液揮發(fā)。