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NEBNext® Ultra™ II DNA PCR-free 文庫制備試劑盒（含純化磁珠）
NEBNext® Ultra™ II FS DNA PCR-free 文庫制備試劑盒 - 含片段化酶
NEBNext® Ultra™ II FS DNA PCR-free 文庫制備試劑盒 - 含片段化酶（含純化磁珠）
產(chǎn)品特點(diǎn)
·起始量范圍廣：250 ng 至 1,000 ng 的起始 DNA 均可制備高質(zhì)量文庫，且無需擴(kuò)增步驟
·更高的文庫產(chǎn)量，獲得更多有用信息
·提高文庫均一性，進(jìn)而提高測序質(zhì)量
·不同類型的起始樣本，均可制備 PCR-free 文庫
·通過優(yōu)化的 PCR-free 實(shí)驗(yàn)流程，減少手動操作時間，并可與自動化兼容
·配合使用 NEBNext 多樣本接頭引物試劑盒 1（Unique 雙端 Index 引物，UMI 接頭，適用于 DNA） （NEB #E7395）或其它具有3' T 突出的適用于 Illumina 平臺的接頭
·也可提供含有樣品純化磁珠的 NEBNext Ultra II DNA PCR-Free 文庫制備試劑盒（含純化磁珠）
產(chǎn)品概述
沒有偏差！基于簡化可靠的 Ultra II 流程，適用于 Illumina® 測序平臺的本試劑盒可為 DNA-seq 提供無需擴(kuò)增的文庫制備流程。即使 DNA 起始量低至 250 ng，也可獲得高質(zhì)量、高產(chǎn)量的文庫，而無需擔(dān)憂 PCR 偏差。
NEBNext Ultra II DNA PCR-Free 文庫制備試劑盒包含不同起始量、已打斷的 DNA 文庫制備所需的所有酶和緩沖液，以便在 Illumina 平臺上進(jìn)行二代測序，且不需要擴(kuò)增步驟?？焖?、用戶友好的流程僅需最少的手動操作時間，在無需 PCR 的情況下，就可獲得優(yōu)異的文庫產(chǎn)量和 GC 覆蓋度。
注意：如果您的起始 DNA 尚未打斷，我們推薦您使用 NEBNext Ultra II FS DNA PCR-Free 文庫制備試劑盒 - 含片段化酶，該試劑盒將 DNA 片段化、末端修復(fù)和加 dA 尾優(yōu)化到同一管中，無需純化或移液。
產(chǎn)品描述：
使用 NEBNext Ultra II DNA PCR-free 文庫制備試劑盒，能獲得更高的文庫產(chǎn)量。
A.以 1 µg NA19240 基因組 DNA（Coriell Institute）為起始樣本，使用 NEBNext Ultra II DNA PCR-free 文庫制備試劑盒和 Illumina TruSeq® PCR-free 文庫制備試劑盒分別制備 PCR-free 文庫，350 bp 插入片段作為篩選標(biāo)準(zhǔn)。
B.分別使用 NEBNext Ultra II DNA PCR-free 文庫制備試劑盒和 Roche Sequencing Kapa HyperPrep 文庫制備試劑盒，結(jié)合 Covaris 打斷，制備 150 - 200 bp 插入片段的文庫，不進(jìn)行片段篩選。根據(jù)生產(chǎn)商推薦方法，NEBNext、Illumina 和 Kapa 試劑盒分別使用了 NEBNext 多樣本接頭引物試劑盒 1（Unique 雙端 Index 引物，UMI 接頭，適用于 DNA）、IDT for Illumina（TruSeq DNA UD Indexes）和 Kapa Dual-Indexed Adaptors。
使用 NEBNext Ultra II DNA PCR-free 文庫制備試劑盒，實(shí)現(xiàn)人類基因組均一覆蓋。相較于 Illumina DNA PCR-free 文庫制備試劑盒，NEBNext Ultra II DNA PCR-free 文庫制備試劑盒可實(shí)現(xiàn)更高的基因組覆蓋度。根據(jù)生產(chǎn)商推薦方法，以 250 ng NA19240 基因組 DNA 為起始樣本制備文庫，使用 NovaSeq 6000 S4 v1.5 flow cell（PE 2 x 150 bp）測序。Reads 去接頭（fastp 0.20.0）后比對至端粒到端粒 chm13 參考基因組（draft 1，bwa-mem 0.7.17），并標(biāo)記重復(fù)（samblaster 0.1.24）。從每個 bam 中隨機(jī)抽取 2.8 B Reads（sambamba view -s 0.6.8）。使用 mosdepth（v0.3.1，-F 772）評估過濾水平和初級覆蓋度，并繪制常染色體或線粒體基因組圖。圖中標(biāo)示出了預(yù)期覆蓋度（num_reads*read length/genome size）。
