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南京沃博生物科技有限公司

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RNA恒溫快速擴增試劑盒(熒光型)

參   考   價: ¥ 3360

訂  貨  量: ≥1 盒

具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號:WLRE8205KIT

品       牌:

廠商性質(zhì):生產(chǎn)商

所  在  地:南京市

更新時間:2020-11-26 12:40:50瀏覽次數(shù):682

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本試劑盒具有靈敏度高、特異性強、反應(yīng)時間短(僅需20 mins)等優(yōu)點,反應(yīng)組分為干粉狀態(tài),操作簡便,易于保存。

RNA恒溫快速擴增試劑盒(熒光型)使用說明書

(貨號:WLRE8205KIT

原理概述:

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術(shù):在常溫恒溫下,特殊修飾的反轉(zhuǎn)錄酶利用特異性引物DNA和模板RNA合成cDNA鏈,反應(yīng)體系中的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA鏈為模板進行快速核酸擴增反應(yīng)。本試劑盒在42 ºC下,依賴核酸外切酶的作用,加入根據(jù)模版設(shè)計的特異的分子探針,使用熒光監(jiān)測設(shè)備能實現(xiàn)對目標(biāo)片段擴增過程的實時監(jiān)控。適用于實驗室級別的RNA擴增以及其他檢測用途的RNA擴增使用。

產(chǎn)品特點:

本試劑盒具有靈敏度高、特異性強、反應(yīng)時間短(僅需20 mins)等優(yōu)點,反應(yīng)組分為干粉狀態(tài),操作簡便,易于保存。

可適用于各種品牌的熒光定量PCR儀,恒溫?zé)晒鈹U增儀器等熒光檢測設(shè)備。

引物設(shè)計:

建議使用長度在 30-35 bp的引物,引物過短會影響擴增速度和檢測靈敏度;引物設(shè)計避免形成二級結(jié)構(gòu)而影響擴增;擴增子長度建議在150-300 bp,通常不超過500 bp。

熒光探針設(shè)計:

探針序列不與特異性引物識別位點重疊,長度為46-52 nt,序列避免回文序列、內(nèi)部二級結(jié)構(gòu)和連續(xù)的重復(fù)堿基。探針共有四個修飾位點:距離5’端的≥35 nt的中部位置標(biāo)記一個dSpacer(,THF),作為核酸外切酶的識別位點;THF位點的上游標(biāo)記一個熒光基團,下游標(biāo)記一個粹滅基團,兩個基團的間距為2-4 nt;THF距離3’末端≥15 nt,并且3’末端標(biāo)記一個修飾基團,例如胺基、磷酸基團或C3-Spacer。

試劑盒組成:

組成

含量

A buffer

1.6 mL×1

B buffer

150 μL×1

試劑

48

使用說明書

1

試劑盒儲存:

運輸條件:低溫運輸;

儲存條件:儲存溫度 ≤ -20 ºC,避光保存,避免重壓、反復(fù)凍融;

產(chǎn)品有效期:12個月。

 

操作步驟:提前30分鐘將試劑盒所需組分取出,室溫融化,震蕩混勻。

1)    每個干粉反應(yīng)管加入29.4 μL A buffer(注意:A buffer需*融化混勻,否則會對實驗效果產(chǎn)生影響);

2)    每個反應(yīng)管分別加入2 μL上游引物、2 μL下游引物和0.6 μL探針(引物和探針濃度為10 μM,對于多個反應(yīng)、步驟1和步驟2可以混合后再分裝至反應(yīng)管中);

3)    向反應(yīng)管中依次加入11.5 μL ddH2O2 μL核酸模板(可根據(jù)核酸濃度調(diào)整加入的核酸模板體積,并相應(yīng)調(diào)整加入的ddH2O體積,至模板與ddH2O總體積為13.5 μL);

4)    zui后向反應(yīng)管中加入2.5 μL B buffer并充分混合(對于多個反應(yīng),建議將B buffer加至反應(yīng)管的蓋子內(nèi)側(cè),上下顛倒反應(yīng)管8-10次混勻);

5)    混勻后,將反應(yīng)液甩(或快速離心)至管子底部,然后立即將反應(yīng)管放入熒光檢測設(shè)備中。熒光檢測程序設(shè)置為:恒溫42 ºC;每30 s采集一次FAM通道(信號采集通道的選擇與熒光探針設(shè)計一致)熒光值;反應(yīng)時間20 mins。

注:如使用ABI系列PCR儀,請務(wù)必于passive referencequencher處均選擇“none”。

體系配制

組分

體積(μL

A buffer

29.4

上游引物(10 μM)

2

下游引物(10 μM)

2

探針(10 μM)

0.6

ddH2ORNA模板

13.5

B buffer

2.5

總體積

50

注意事項:

1  由于試劑盒靈敏度非常高,在進行反應(yīng)時請注意避免微量核酸污染,并盡量考慮設(shè)置空白對照以確認(rèn)是否有核酸污染。

2  試劑盒保質(zhì)期12個月。每次使用時,請取出實驗所需的MIRA反應(yīng)單元的數(shù)量,置于冰浴條件下并在8小時內(nèi)使用;剩余部分,請置于存儲條件下。

 

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DNA恒溫快速擴增試劑盒(熒光型)WLE8202KIT48份/盒
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RNA恒溫快速擴增試劑盒(熒光型)WLRE8205KIT48份/盒
HybriDetect試紙條WLFS820150條/包

FS DNA 文庫制備試劑盒

NEBNext Ultra II DNA 文庫制

DNA PCR-free 文庫

使用 NEBNext Ultra II DNA P

NEBNext® U

使用 NEBNext Ultra II DNA P

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