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南京億迅生物科技有限公司

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半胱氨酸(cysteine, Cys)含量測定試劑盒

2019-12-24  閱讀(388)

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【詳細說明】

測定意義:

蛋白質含有三種含硫氨基酸:甲硫氨酸胱氨酸Cys。其中,Cys是一種含有巰基的含硫氨基酸,從甲硫氨酸轉化而來,并且可與胱氨酸互相轉化。Cys參與蛋白質二硫鍵的形成,經常是蛋白質活性中心的組成部分,還可以為其它生理生化反應提供巰基。此外,Cys大量積聚在皮膚和粘膜表面,在角蛋白生成中維持重要的巰基酶的活性,并且補充巰基,以維持皮膚的正常代謝,調節(jié)表皮下層的色素細胞生成的底層黑色素。具有美白、解毒、改善炎癥和過敏性皮膚等作用。

測定原理:

Cys還原磷鎢酸生成鎢藍,在600nm處有吸收峰;通過600nm吸光度,計算Cys含量。

自備儀器和用品:

低溫離心機、可調式移液槍、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、磷酸和蒸餾水。

試劑組成和配置:

試劑一:液體×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體×1瓶,4℃保存。

試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。用前1天,向試劑三中加2.5mL蒸餾水充分溶解,再加磷酸0.625mL,混勻后蓋緊(防止水分散失)沸水浴2h;冷卻后加10mL蒸餾水,4℃可保存2周。

標準品:液體×1瓶,1μmol/mL標準液,4℃保存。

半胱氨酸提?。?/span>

  1. 液體樣品中半胱氨酸提取:取0.1mL液體樣品,加試劑一0.9mL,充分混勻,11000 rpm 4℃離心10min,取上清液,待測。
  2. 組織中半胱氨酸提?。悍Q取約0.1 g組織,加入試劑一1 mL,冰上充分研磨,11000 rpm 4℃離心10 min,取上清液待測。

測定操作:

1. 酶標儀預熱30 min以上,調節(jié)波長到600 nm,蒸餾水調零。

2. 空白管:1mL玻璃比色皿,加入20μL蒸餾水,100μL試劑二,100μL試劑三,混勻后室溫靜置15 min,于600nm處測定吸光值,記為A空白管。

3. 標準管:1mL玻璃比色皿,加入20μL標準液,100μL試劑二,100μL試劑三,混勻后室溫靜置15 min,于600nm處測定吸光值,記為A標準管。

4. 測定管:1mL玻璃比色皿,加入20μL上清液,100μL試劑二,100μL試劑三,混勻后室溫靜置15 min,于600nm處測定吸光值,記為A測定管。

樣品中半胱氨酸含量計算:

1. 按液體樣品的體積計算

半胱氨酸含量(μmol/mL

=[C標準品×V標準品×(A測定-A空白)÷(A標準-A空白)]×(V樣總÷V樣)

=10×(A測定-A空白)÷(A標準-A空白)

C標準品:標準品濃度,1 μmol/mL;V標準品:反應體系中加入標準品體積,0.1 mL;V樣:反應體系中加入樣品提取液體積,0.1 mL;V樣總:樣品提取液,1mL。

2. 按鮮重計算

半胱氨酸含量(μmol/g FW

=[C標準品×V標準品×(A測定-A空白)÷(A標準-A空白)]×(V樣總÷V樣)÷W

=1×(A測定-A空白)÷(A標準-A空白) ÷W

W:樣品質量,g。



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