細(xì)胞：H2009細(xì)胞
中文名稱：人肺腺癌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基：MEM+10%FBS +1%ITS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)，Cas9蛋白可以結(jié)合并切割任意DNA。一種新方式使用Cas9，讓它激活特定基因的轉(zhuǎn)錄，從而表達(dá)或抑制特定的遺傳學(xué)性狀。把Cas9與延長(zhǎng)了三倍的轉(zhuǎn)錄因子融合起來(lái)，使其能夠強(qiáng)力控制單個(gè)或多個(gè)基因的表達(dá)。
在基因工程領(lǐng)域，能控制遺傳學(xué)性狀的旋鈕越多越好。它們可以控制多個(gè)基因，決定特定遺傳學(xué)性狀的表達(dá)或表達(dá)程度。現(xiàn)在我們可以極為精確的上調(diào)或下調(diào)基因表達(dá)。在體外培養(yǎng)的酵母、小鼠和人類細(xì)胞中證實(shí)了這一技術(shù)操縱基因表達(dá)的能力。
人類基因組90%的區(qū)域并不翻譯成蛋白質(zhì)，曾經(jīng)被認(rèn)為是無(wú)用的垃圾。后來(lái)發(fā)現(xiàn)，這一區(qū)域的基因以一種神秘的方式起作用，而且這些基因往往串聯(lián)起來(lái)發(fā)揮作用。開(kāi)發(fā)的新方法，可以靶標(biāo)和激活這些人們知之甚少的DNA暗物質(zhì)。
除了揭開(kāi)DNA暗物質(zhì)的秘密，Cas9還能將合成的基因環(huán)引入基因組，觸發(fā)全新的基因表達(dá)或者改變基因表達(dá)。用 Cas9精確操縱一連串基因，對(duì)干細(xì)胞工程也有很大的幫助，有助于開(kāi)發(fā)移植用的器官和再生療法。
必須加快對(duì)發(fā)育生物學(xué)的理解，可以快速干擾和分析大量基因組合，大大提升鑒定發(fā)育通路的速度。
誘導(dǎo)干細(xì)胞分化成大腦神經(jīng)元。Cas9在編程神經(jīng)元發(fā)育時(shí)比傳統(tǒng)方法好40倍。
