細(xì)胞：NCTC2472細(xì)胞
中文名稱：小鼠纖維肉瘤細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基：DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液(每周 2-3 次)，待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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光遺傳學(xué)涉及到對(duì)神經(jīng)元進(jìn)行遺傳修飾，使其產(chǎn)生一種光敏蛋白，當(dāng)暴露在光照中時(shí)就會(huì)發(fā)送電信號(hào)。到目前為止光遺傳學(xué)技術(shù)主要被用于研究大腦如何工作。
探索將其作為一種治療手段的可行性，但對(duì)大腦進(jìn)行不可逆的基因操控所引發(fā)的擔(dān)憂成為他們面臨的最大障礙。
在實(shí)驗(yàn)室里修改了小鼠的干細(xì)胞，然后將它們移植到小鼠的腿部神經(jīng)中。這樣做的目的是，一旦有問(wèn)題出現(xiàn)，移植的干細(xì)胞能夠更容易被去除。
研究在小鼠胚胎干細(xì)胞中插入了編碼光響應(yīng)蛋白的藻類基因，通過(guò)添加信號(hào)分子，使干細(xì)胞發(fā)育成負(fù)責(zé)讓信號(hào)在脊髓和身體其他部位來(lái)回傳遞的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元。
接下來(lái)這些神經(jīng)元被植入自身神經(jīng)已被切斷的小鼠的坐骨神經(jīng)。待5周后植入神經(jīng)元與肌肉融合，研究對(duì)小鼠實(shí)施了麻醉，剖開(kāi)其皮膚，并用藍(lán)色脈沖光照射神經(jīng)。他們觀察到，小鼠腿部肌肉產(chǎn)生了收縮反應(yīng)。
目前大部分正在開(kāi)發(fā)的針對(duì)癱瘓病人的治療方法都需要對(duì)他們的神經(jīng)或肌肉進(jìn)行電刺激。如果患者的痛神經(jīng)元仍能工作，這可能給他們帶來(lái)痛苦。此外，電刺激會(huì)使肌肉收縮過(guò)于用力，很快出現(xiàn)肌肉疲勞。而光遺傳學(xué)方法對(duì)肌纖維的刺激則更為平緩。
為了讓這項(xiàng)技術(shù)更適用于人體，研究正在開(kāi)發(fā)一種護(hù)腕形式的發(fā)光二極管，其可與皮膚下的微型電池組相連，作用于周圍神經(jīng)。他們還試圖用患者皮膚培育的誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPS細(xì)胞)來(lái)替代胚胎干細(xì)胞，這樣患者就無(wú)需借助藥物來(lái)抑制免疫反應(yīng)。
目標(biāo)是幫助那些無(wú)力控制呼吸肌的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病人。正在研制一個(gè)可以反復(fù)照亮胸膈神經(jīng)的心臟起搏器，并計(jì)劃在豬身上進(jìn)行測(cè)試，希望用它恢復(fù)豬的呼吸能力。
