細(xì)胞:mMSCs細(xì)胞
中文名稱:小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
生長(zhǎng)特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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干細(xì)胞研究的命運(yùn)倫理問題之爭(zhēng)仍在
成人細(xì)胞中的核被移植到卵細(xì)胞后,卵細(xì)胞中某些未知的因子能將核中的生物鐘回調(diào),使它回到胚胎狀態(tài),但科學(xué)家們對(duì)這一調(diào)控過(guò)程的分子機(jī)理還一無(wú)所知,目前只知道,只有通過(guò)卵子細(xì)胞才能完成該過(guò)程。
因此卵子的獲得將決定干細(xì)胞治療能否成功,這一具有抗生素一樣革命意義的新療法,正面臨著卵子供應(yīng)的瓶頸。
卵子的捐獻(xiàn)程序往往令捐獻(xiàn)者非常不舒服,甚至疼痛,還有發(fā)生并發(fā)癥的危險(xiǎn)。為了刺激排卵,捐卵的女性需要接受激素注射,可能發(fā)生激素引發(fā)的并發(fā)癥;
為了從卵巢中取出卵細(xì)胞,往往需要將一根針通過(guò)陰插入子宮;少數(shù)捐獻(xiàn)者會(huì)發(fā)生卵巢高度刺激綜合征,這些人中還有少數(shù)發(fā)生腎衰。
科學(xué)家們對(duì)卵子的捐獻(xiàn)爭(zhēng)議不斷。即使按照倫理章程獲得卵細(xì)胞,人們對(duì)卵子捐獻(xiàn)的看法也不一樣,一些科學(xué)家堅(jiān)決主張不用人類卵子,而是用動(dòng)物的卵細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
另外是否對(duì)捐獻(xiàn)者給予報(bào)酬各方意見也不一樣,有的不主張給錢,認(rèn)為這樣可能導(dǎo)致一些婦女為錢捐獻(xiàn)卵子而忽視甚至無(wú)視捐卵子可能帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn);有人主張給錢,通過(guò)合同防止一些捐獻(xiàn)者中途退出造成實(shí)驗(yàn)無(wú)法繼續(xù)。
科學(xué)家們認(rèn)為,由于卵子供應(yīng)的短缺以及克隆過(guò)程的效率無(wú)法知道,克隆干細(xì)胞在治療領(lǐng)域的運(yùn)用范圍最終不會(huì)很廣,它不會(huì)像開個(gè)處方藥那么簡(jiǎn)單,而是像腎移植療法一樣,只是用于少數(shù)特殊病人的治療,比如,為挽救自己的孩子,某位媽媽捐獻(xiàn)自己的一些卵細(xì)胞來(lái)克隆出干細(xì)胞。