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PCR試劑盒

它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增巴斯德氏桿菌屬，與其他微生物沒有交叉反應(yīng)。

3. 提供陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

規(guī)格及成分

成分	編號(hào)	十孔盒包裝
PCR MagicMix 3.0	試劑一	1 mL（紅蓋）
超純水	試劑二	1 mL（亮黃色）
巴斯德氏桿菌屬PCR引物混合液	試劑三	100 μL（白蓋）
巴斯德氏桿菌屬PCR 陽性對(duì)照（1×10E8 拷貝/μL）	試劑四	50 μL（黃蓋）
核酸釋放劑（試用裝）	試劑五	20 次（1 mL，綠蓋）
使用手冊	試劑六	1 份

運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。

自備試劑：樣品 DNA。

PCR試劑盒使用方法：

一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送20 次核酸釋放劑試用裝，其使用手冊可以從本公司網(wǎng)站訂購核酸釋放劑。

2. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽性對(duì)照和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽性對(duì)照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 補(bǔ)骨脂 PCR 陽性對(duì)照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對(duì) N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分：

成分	N+2 個(gè)樣品管	PCR 陰性對(duì)照	PCR 陽性對(duì)照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
巴斯德氏桿菌屬PCR引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 個(gè)樣品 DNA 模板	各 18 μL	--	--
PCR 陰性對(duì)照（水）	--	18 μL	--
PCR 陽性對(duì)照（巴斯德氏桿菌屬PCR陽性對(duì)照的 1000 倍稀釋液）	--	--	18 μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR 反應(yīng)（35 個(gè)循環(huán)）	95℃	15 sec
	57℃	15 sec
	72℃	40 sec
后延伸	72℃	10 min

三、電泳檢測

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽性對(duì)照必須有預(yù)期條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí)驗(yàn)無效。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。