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上海酶聯(lián)生物研究所

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人膽管癌細胞(QBC-939)

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所在地上海市

更新時間:2017-07-25 17:25:36瀏覽次數(shù):323次

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人膽管癌細胞(QBC-939)
細胞介紹:
該細胞由第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院建系于1997年,細胞來源于一位接受了肝膽手術的肝外膽管癌患者。
細胞特性
1)來源:肝外膽管腫瘤
2)形態(tài):上皮細胞樣,貼壁生長
3)含量:>lxl06 個/mL
4)污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規(guī)格:T25瓶或者lmL凍存管包裝
運輸和保存:使用T25瓶充液發(fā)送活細胞。收到細胞后,請先在顯微鏡下檢查細胞生長狀態(tài),并將T25瓶置于培養(yǎng)箱約6h或過夜后,再次檢查細胞狀態(tài)。若狀態(tài)良好,可按照以下細胞培養(yǎng)步驟進行細胞后續(xù)處理操作。若發(fā)現(xiàn)可疑污染物,請及時與我們取得。細胞用途:僅供科研使用。


人膽管癌細胞(QBC-939)
細胞培養(yǎng)步驟
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
2.準備 RPIVM-1640 培養(yǎng)基(RPIVM-1640:GIBCO,貨號 31800022,添加 NaHC031.5g八,D-葡萄糖2.5g八,丙酮酸鈉O.llg八),90%;優(yōu)質胎牛血清,10%。或準備DMEM培養(yǎng)基(GIBCO,貨號11995-065),90%;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
3.培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
4.凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
2)細胞處理:
復蘇細胞:將含有l(wèi)mL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入l〇cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。


人膽管癌細胞(QBC-939)
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
力口 2m丨消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37°C培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量*,細胞變圓脫落后,加入約lml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加1〇%DMSO后進行凍存。
注意事項:
收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們。
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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