人組織細胞淋巴瘤細胞(U937)
細胞介紹
該細胞是由Nilsson K實驗室于1974年從一名37歲的患有惡性組織細胞性淋巴瘤的白人男性的胸水中分離建立的。1979年來的研究顯示該細胞在人混合淋巴細胞培養(yǎng)物上清、佛波酯、VitD3、\z-IFN、TNF和*的誘導下可以向終末單核細胞分化。該細胞不合成免疫球蛋白,EBV陰性;可產(chǎn)生*、(3-2-微球蛋白,受PMA刺激后可產(chǎn)生TNF-ct;表達C3R;可作轉(zhuǎn)染宿主;表達Fas,對TNF和抗Fas的抗體敏感。
細胞特性
1)來源:淋巴瘤
2)形態(tài):單核細胞,懸浮生長
3)含量:>lxl06 個/mL
4)污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規(guī)格:T25瓶或者lmL凍存管包裝
運輸和保存:
使用T25瓶充液發(fā)送活細胞。收到細胞后,請先在顯微鏡下檢查細胞生長狀態(tài),并將T25瓶置于培養(yǎng)箱約6h或過夜后,再次檢查細胞狀態(tài)。若狀態(tài)良好,可按照以下細胞培養(yǎng)步驟進行細胞后續(xù)處理操作。若發(fā)現(xiàn)可疑污染物,請及時與我們?nèi)〉谩?/p>
人組織細胞淋巴瘤細胞(U937)
細胞用途:僅供科研使用。
細胞培養(yǎng)步驟
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1.準備 RPIVM-1640 培養(yǎng)基(RPIVM-1640:GIBCO,貨號 31800022,添加 NaHC031.5g八,
D-葡萄糖2.5g八,丙酮酸鈉O.llg八),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2.培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3.凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
2)細胞處理:
復蘇細胞:將含有l(wèi)mL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤雔〇cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
人組織細胞淋巴瘤細胞(U937)
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1: 2到1: 3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。懸浮細胞凍存時,應(yīng)將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
注意事項:
收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們。
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。