幾丁質(zhì)酶測(cè)試盒_糖代謝系列
測(cè)定方法:分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/24樣
注 意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
幾丁質(zhì)主要存在于蝦、蟹、昆蟲(chóng)等甲殼類(lèi)動(dòng)物的外殼與軟體動(dòng)物的器官(例如烏賊的軟骨),以及真菌類(lèi)的細(xì)胞壁中。而幾丁質(zhì)酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質(zhì)水解,具有抵御真菌侵染的作用,成為抗真菌病害的研究熱點(diǎn)。
測(cè)定原理:
幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生N-乙酰氨基葡萄糖,進(jìn)一步與對(duì)二甲氨基苯甲-醛產(chǎn)生紅色化合物,在585nm處有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了幾丁質(zhì)酶的活性。
幾丁質(zhì)酶測(cè)試盒_糖代謝系列
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、水浴鍋、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿,蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體10mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體10mL×1瓶,4℃保存。(若出現(xiàn)結(jié)晶,可80℃左右加熱溶解后使用)
試劑三:液體10mL×1瓶,4℃保存。
試劑四:液體20mL×1瓶,4℃避光保存。
粗酶液提?。?/p>
1.組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后10000g,4℃離心20min,取上清,置冰上待測(cè)。
2.真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后10000g,4℃,離心20min,取上清置于冰上待測(cè)。
3.培養(yǎng)液:直接測(cè)定。