α-半乳糖苷酶(α-GAL)測(cè)試盒_糖代謝系列
測(cè)定方法:分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/24樣
注 意 :正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
α-GAL (EC 3.2.1.22)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,能專(zhuān)一地催化α半乳糖苷鍵的水解,主要參與棉子糖、水蘇糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。α-GAL對(duì)于植物種子的萌發(fā)至關(guān)重要,種子萌發(fā)初期,其催化產(chǎn)生的D-半乳糖通過(guò)糖酵解途徑迅速轉(zhuǎn)化和消耗,為種子的萌發(fā)提供初的能量來(lái)源,后期則主要參與細(xì)胞壁儲(chǔ)藏多糖水解。
α-半乳糖苷酶(α-GAL)測(cè)試盒_糖代謝系列
測(cè)定原理:
α-GAL分解對(duì)-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷生成對(duì)-硝基苯-酚,后者在400nm有大吸收峰,通過(guò)測(cè)定吸光值升高速率來(lái)計(jì)算α-GAL活性。
自備用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加入5mL蒸餾水,充分溶解備用;用不完的試劑仍-20℃保存。
試劑二:液體15mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體50mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提?。?/p>
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。