WST-8屬于MTT的升級產(chǎn)品，工作原理為：在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物(formazan)。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450mM波長處測定OD值，間接反映活細(xì)胞數(shù)量。上海創(chuàng)賽提：供WST-8水溶性四氮唑-8，193149-74-5，商品編號：CLS-42493-100mg，價格930元

　　CCK法應(yīng)用非常廣泛，如藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等。

　　CCK法的操作步驟

　　實(shí)驗一：細(xì)胞活性檢測

　　1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100μL/孔)，將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)(37℃,5% CO2)。

　　2、向每孔加入10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù))。

　　3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。

　　4、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。

　　5、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。

　　實(shí)驗二：細(xì)胞增殖-毒性檢測

　　1、在96孔板中配置100μL的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(37℃，5% CO2)。

　　2、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測物質(zhì)。

　　3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間(例如：6、12、24或48小時)。

　　4、向每孔加入10μL CCK溶液(注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù))。

　　5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。

　　6、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。

　　7、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。

　　注意：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基)，去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。上海創(chuàng)賽提供供：65162-13-2，1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸甲酯鹽[用于生化研究]，商品編號：C12-M1442-200MG，價格1974元

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