磁珠法口腔拭子基因組DNA提取試劑盒
【目錄號(hào)】：D004（100 preps）
【保存條件】
室溫保存（15-30℃），有效期為12個(gè)月。
【試劑盒組成】
試劑名稱 | 規(guī)格 | |
1 | 裂解液 | 20ml |
2 | 蛋白酶混合液 | 2ml |
3 | 磁珠 | 1ml |
4 | 洗液一 | 60ml |
5 | 洗液二 | 60ml |
6 | 洗脫液 | 6ml |
【預(yù)期用途】
本試劑盒適用于人唾液、口腔黏液、口腔拭子等樣品中快速提取、純化基因組DNA的試劑盒，樣品經(jīng)簡(jiǎn)單預(yù)處理后直接提取，提取產(chǎn)物純度高，片段完整，可用于后續(xù)各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，如酶切、PCR、熒光定量PCR、文庫(kù)構(gòu)建、Southern雜交等。
【自備儀器和試劑】
1) 恒溫水浴鍋，Votex
2) 80%乙醇，異丙醇
【操作步驟】
1. 取待檢唾液樣本200μl，依次加入20μl蛋白酶混合液、200μl裂解液，漩渦振蕩10s，56°C孵育10分鐘。
2. 然后加入300μl異丙醇和10μl磁珠，上下顛倒離心管10次，使管內(nèi)磁珠分布均勻。
3. 靜置離心管10分鐘，每隔兩分鐘上下顛倒離心管5次，使管內(nèi)磁珠分布均勻。
4. 將離心管置于離心機(jī)上，8000g離心1min，用移液器吸去管內(nèi)液體。
5. 加入600μl洗液一，用移液器槍頭輕柔打散管壁磁珠，漩渦振蕩10s，直至其分布均勻。
6. 將離心管置于離心機(jī)上，8000g離心1min。用移液器吸去管內(nèi)液體。
7. 加入600μl洗液二，用移液器槍頭輕柔打散管壁磁珠，漩渦振蕩10s，直至其分布均勻。
8. 將離心管置于離心機(jī)上，8000g離心1min。用移液器吸去管內(nèi)液體。
9. 加入600μl的80%乙醇，用移液器槍頭輕柔打散管壁磁珠，漩渦振蕩10s，直至其分布均勻。
10. 將離心管至于離心機(jī)上，8000g離心1min。用移液器吸去管內(nèi)液體。
11. 將離心管至于離心機(jī)上，8000g離心30s。用移液器吸去管內(nèi)殘余液體。
12. 打開(kāi)管蓋，室溫干燥2分鐘。
13. 加入60μl洗脫液，用移液器槍頭打散管壁磁珠，直至其分布均勻。56°C孵育3分鐘。
14. 將離心管至于離心機(jī)上，10000g離心1min。吸取上清至一個(gè)無(wú)核酶干凈的離心管中，此即為純化后的核酸溶液。
【注意事項(xiàng)】
1.所有吸棄上清的操作都不能將磁珠吸出。
2.每次洗滌都需要移液器槍頭輕柔打散管壁磁珠，漩渦振蕩10s，直至其分布均勻。
3.裂解液必須*溶解為均一液體，如果出現(xiàn)渾濁或者沉淀，請(qǐng)將其置于37-56℃孵育直至澄清。
4.本試劑盒涉及的檢測(cè)樣本應(yīng)視為具有傳染性物質(zhì)，操作和處理均需符合衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》和《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》相關(guān)要求。
