Perfect SYBR Green Master Mix使用說明書
Item: V001
產(chǎn)品描述
Perfect SYBR Green Master Mix是一種即用型的2×預(yù)混液,由BesTaq DNA熱啟動酶、SYBR GreenⅠ、dNTPs、Mg2+以及相關(guān)緩沖液組成,只需加入引物、模板和無菌水即可進行qPCR反應(yīng)。
n 特異性高:熱啟動及優(yōu)化好的緩沖液可防止非特異性擴增和引物二聚體。
n 靈敏度好:可精確定量低至10拷貝的模板。
n 線性范圍廣:可精確定量9個數(shù)量級。
n 通用性好:cDNA、gDNA、質(zhì)粒DNA、病毒DNA均可作為模板,并兼容所有的熒光PCR儀。
n 使用方便:實驗過程無需冰上操作。
儲存條件
-20℃保存12個月,使用前充分溶解混勻。
短期使用可放4℃保存,避免反復(fù)凍融。
注意事項
1. SYBR Green I 強光下易分解,使用時避免長時間強光照射本產(chǎn)品。
2. 本制品不含內(nèi)參ROX染料。
使用方法
1. 反應(yīng)液配制
反應(yīng)液成分 | 體積 | 終濃度 |
12.5μl | 1× | |
正向引物(10μM) | 0.5μl | 200nM |
反向引物(10μM) | 0.5μl | 200nM |
模板* | 5μl | |
總計 | 補ddH2O至25μl |
*gDNA的模板用量不超過500ng,cDNA不超過50ng。
2. PCR循環(huán)條件的設(shè)定
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) | |
1 | 預(yù)變性 | 95℃ | 5min | 1 cycle |
2 | 變性 | 95℃ | 10s | 40 cycles |
3 | 退火、延伸 | 60℃ | 45s | |
反應(yīng)結(jié)束后應(yīng)進行熔解曲線分析 |
3. 實驗結(jié)果分析
根據(jù)擴增曲線和熔解曲線的結(jié)果進行熒光定量PCR數(shù)據(jù)分析。