羊駝肺來源細(xì)胞細(xì)胞傳代培養(yǎng)和注意事項

【資料簡介】

羊駝肺來源細(xì)胞細(xì)胞傳代培養(yǎng)
一、原理 　　細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長，同時也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）。 　　傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分 　　瓶。 
二、材料和試劑 　　1、細(xì)胞：貼壁細(xì)胞株 　　2、試劑：0.25%、1640培養(yǎng)基（含10%小牛血清） 　　3、儀器和器材：倒置顯微鏡，培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、吸管、廢液缸等 
三、操作步驟 　　1、將長滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。 　　2、加入0.5—1ml 0.25%溶液，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中?！　?、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀察細(xì)胞。隨著時間的推移，原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時將棄去，加入10ml培養(yǎng)液終止消化。 　　觀察消化也可以用肉眼，當(dāng)見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1—3分鐘。 　　4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中，實(shí)踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞，置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況?！　「剑合号渲品椒ǎ?nbsp;　　稱取0.25克蛋白酶（活力為1：250），加入100ml無Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，濾器過濾除菌，4℃保存，用前可在37℃下回溫。 　　溶液中也可加入EDTA，使zui終濃度達(dá)0.02%。

羊駝肺來源細(xì)胞注意事項：
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過夜，隔天再取出觀察。此時多數(shù)細(xì)胞均會貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺盼藍(lán)染色測定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常，請將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活力，請拍下照片及時和我們，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。
4. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。
5. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和公司技術(shù)部溝通交流。
6. 該細(xì)胞只能用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。