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小鼠白三烯C4(LTC4)ELISA的操作說明

2011年03月18日 09:10:47人氣:1081來源:上海勁馬實驗設備有限公司

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【資料簡介】

1.         標準品的稀釋:小鼠白三烯C4(LTC4)ELISA試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

240ng/L
 5號標準品
 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
 
120ng/L
 4號標準品
 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
 
60ng/L
 3號標準品
 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
 
30ng/L
 2號標準品
 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
 
15ng/L
 1號標準品
 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
  2.        加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7.         溫育:操作同3。

8.         洗滌:操作同5。

9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

 
 

上海勁馬實驗設備有限公司作者

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