小鼠雌激素（E）試劑盒組成

　　注意事項
　　1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
　　2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
　　3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
　　4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔OD值的），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
　　5．嚴格按說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
　　6．本試劑不同批號組分不得混用。
　　7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
　　8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
　　9．底物請避光保存。
　　
　　標本處理及要求
　　1．血清、血漿標本可直接測定；
　　2．組織：取相關組織1g于5mlPBS中勻漿，室溫孵育5小時（期間不時旋渦混合）后，2000-3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘后，取上清液待測。
　　3．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
　　4．采集后盡早進行實驗，若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
　　
　　操作步驟
　　1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上按序設標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；再各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后，在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉；再各取50μl分別加到第五、第六孔中；再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中；再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中；再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為36pmol/L，24pmol/L，12pmol/L，6pmol/L，3pmol/L）。
　　2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，輕輕晃動混勻。
　　3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
　　4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
　　5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
　　6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
　　7.溫育：操作同3。
　　8.洗滌：操作同5。
　　9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
　　10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
　　11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
　　
　　計算
　　以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
　　
　　保存條件及有效期
　　1．試劑盒保存：；2-8℃。
　　2．有效期：6個月