一、液相色譜儀主要操作步驟

1． 過濾流動(dòng)相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜。   

2． 對抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。  

3． 打開HPLC工作站（包括計(jì)算機(jī)軟件和色譜儀），連接好流動(dòng)相管道，連接檢測系統(tǒng)。  

4． 進(jìn)入HPLC控制界面主菜單，點(diǎn)擊manual，進(jìn)入手動(dòng)菜單。   

5． 有一段時(shí)間沒用，或者換了新的流動(dòng)相，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥，需要在manual菜單下，先點(diǎn)擊purge，再點(diǎn)擊start，沖洗時(shí)速度不要超過10 ml/min。   

6． 調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動(dòng)相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。點(diǎn)擊injure，選用合適的流速，點(diǎn)擊on，走基線，觀察基線的情況。   

7． 設(shè)計(jì)走樣方法。點(diǎn)擊file，選取select users and methods，可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個(gè)新的方法，點(diǎn)擊new method。選取需要的配件，包括進(jìn)樣閥，泵，檢測器等，根據(jù)需要而不同。選完后，點(diǎn)擊protocol。一個(gè)完整的走樣方法需要包括：a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流，一般2-5分鐘；b.基線歸零；c.進(jìn)樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換；d.走樣時(shí)間，隨不同的樣品而不同。   

8． 進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣方法，點(diǎn)擊start。進(jìn)樣，所有的樣品均需過濾。方法走完后，點(diǎn)擊postrun，可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。   

9． 關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)計(jì)算機(jī)，再關(guān)液相色譜。   

10)． 填寫登記本，由負(fù)責(zé)人簽字。

二、液相色譜儀注意事項(xiàng)：

1． 流動(dòng)相均需色譜純度，水用20M的去離子水。脫氣后的流動(dòng)相要小心振動(dòng)盡量不引起氣泡。

2． 柱子是非常脆弱的，*次做的方法，先不要讓液體過柱子。   

3． 所有過柱子的液體均需嚴(yán)格的過濾。  

4． 壓力不能太大，不要超過2000 psi

5.  選擇高品質(zhì)的柱子，并注意使用方法；可以延長柱子的使用壽命。一般認(rèn)為同一廠牌、同一型號的柱子之間的品質(zhì)都相同，對品質(zhì)管理很嚴(yán)格的廠家而言，這說法是成立的。但如果廠家品質(zhì)管理不夠嚴(yán)格，即使是同一批號的新柱子之間的品質(zhì)也有差異。所以，選用柱子時(shí)必須選擇管理嚴(yán)格的高品質(zhì)柱子，我們知道，任何柱子使用過后都會產(chǎn)生變化。尤其如在強(qiáng)酸或強(qiáng)堿條件下使用，柱子更易產(chǎn)生變化。因此，應(yīng)盡量選用pH適用范圍大的柱子。在開發(fā)新分析方法時(shí)，許多專家建議不要使用舊柱子。因柱子一經(jīng)使用。柱性會改變；如此一來，使用舊柱子開發(fā)出來的新分析方法，很可能在再使用同廠牌的新柱子分析時(shí)。發(fā)生無法達(dá)到預(yù)定效果的情況。