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生物通報道:熒光蛋白被廣泛應(yīng)用于細胞生物學中,幫助顯現(xiàn)活細胞中的生物過程或大生物分子形態(tài)改變。自20世紀90年代初伊始,熒光蛋白就成為了生物科學領(lǐng)域zui重要的研究工具之一,幫助觀察從前無法看到生物過程,例如大腦中神經(jīng)細胞的發(fā)育、癌細胞的擴散等。2008年的諾貝爾化學獎授予了發(fā)現(xiàn)和推廣這一技術(shù)的科學家,其中也包括華裔科學錢永健。錢永健實驗室一直致力于熒光蛋白的研究,從這一實驗室也出來了不少這一領(lǐng)域的青年科學家,美國Scintillon研究所光生物學與生物成像系的Nathan C Shaner就是其中一直,他曾在錢教授的指導下成功改造了單節(jié)顯性的蛋白——mRFP1的熒光屬性,使它有用作為一個生物標記。
在這一基礎(chǔ)上,Shaner等人又從頭索動物文昌魚的四聚體熒光蛋白中分離獲得了一種新的單體黃綠色熒光蛋白mNeonGreen。這是目前的青色熒光蛋白的優(yōu)良熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)受體。研究顯示mNeonGreen是亮度zui強的單體綠色或黃色熒光蛋白,執(zhí)行特殊成像效果與融合標簽在傳統(tǒng)成像中的效果一樣好,可用于隨機單分子超分辨成像的融合標記??茖W家們通常將青色熒光蛋白(CFPs)連接到參與內(nèi)部或構(gòu)象改變的蛋白質(zhì)上,借以觀測或細胞內(nèi)大量的生物進程。研究人員利用藍光照射細胞使細胞內(nèi)的CFP蛋白發(fā)射出特征性的藍綠色光從而幫助定位細胞內(nèi)CFP,確定觀察目標。
除了mNeonGreen之外,錢永健等人還設(shè)計出了兩個熒光蛋白,Clover 和mRuby2,,這兩者分別具有目前為止zui明亮的綠色和紅色,并且具有此前沒有達到的,zui高的Förster臨界半徑(Förster radius)——是指每一對FRET間50%能量轉(zhuǎn)移時的距離。在激酶活性報告系統(tǒng)中利用Clover 和mRuby2替換CFP和YFP,小分子GTPase活性和跨膜電壓顯著提高了耐光性,F(xiàn)RET的動態(tài)范圍和發(fā)射率變化,這些改進能提高對短暫生化事件的靈敏性。另外還有研究人員利用一種淡水鰻魚克隆出了一個不同尋常熒光蛋白UnaG的基因,由此他們發(fā)現(xiàn)了使*與UnaG結(jié)合,激發(fā)UnaG光發(fā)射的一種新型熒光機制。利用這一特性,他們開發(fā)出了一種高度敏感、準確和快速的新*檢測方法,其有可能成為的臨床標準,并應(yīng)用于兒童肝健康成為主要問題的發(fā)展中國家。
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