1、 培養(yǎng)基PH濃度、小牛血清量及培養(yǎng)箱溫度的恒定是培養(yǎng)成功關(guān)鍵;
2、秋水仙素適量、適宜的處理時(shí)機(jī)和時(shí)間,是獲得良好、足夠分裂相的條件。分裂相的多少和染色體形態(tài)及帶型處理良好與否均受其影響。
3、低滲處理是獲得分散良好的分裂相關(guān)鍵步驟,低滲過度或不足都會(huì)造成染色體形態(tài)不良的結(jié)果。在低滲處理時(shí)期細(xì)胞十分嬌嫩,并且表面發(fā)粘,低滲細(xì)胞混勻時(shí),吹打要適宜,避免細(xì)胞破碎及粘團(tuán),另外不要將細(xì)胞吸到吸管上部及離心管上部,避免細(xì)胞丟失。
4、固定技術(shù)是制備良好分散的染色體的重要步驟。若染色體分?jǐn)?shù)不良,可適當(dāng)加大冰乙酸含量,其同時(shí)有改善由于低滲處理不夠或固定不充分所造成的缺陷,但過量會(huì)造成染色體形態(tài)變化和影響分帶結(jié)局。染色體形態(tài)不良與固定液速度有關(guān),加第1次固定液過快或打過快,可造成飄帶樣染色體; 5、固定液每次使用必須新鮮配制,否則將會(huì)形成酯類,從而影響固定效果。6、滴片是染色體制備中影響染色體形態(tài)的關(guān)鍵一步。首先要載玻片要非常干凈,否則會(huì)影響染色體的分散和分帶效果。其次是滴片的距離、滴加量多少、制片的方式都會(huì)影響染色體分期效果。 7、烤片:是染色體制備中zui后一步技術(shù)??酒臏囟?、時(shí)間與染色體形態(tài)和分帶有關(guān)。不宜溫度過高和烤片時(shí)間過長。
十四、染色體實(shí)驗(yàn)技術(shù)分析
染色體分裂指數(shù)低:患者處于非常時(shí)期(感染期、放、期):
培養(yǎng)基營養(yǎng)成份不良;
培養(yǎng)基PH偏低或偏高;
PHA過量或不足;
小牛血清質(zhì)量不高;
小牛血清數(shù)量偏低或過高;
培養(yǎng)溫度不穩(wěn)定;
培養(yǎng)箱溫度偏低;
秋水仙素處理時(shí)間過短;
離心時(shí)間或速度不足;
制備過程損失過大。
染色體形態(tài)不理想:受檢者處于非常時(shí)期;
PHA過量;
小牛血清質(zhì)量不高;
培養(yǎng)箱溫度不恒溫;
秋水仙素量不當(dāng);
低滲時(shí)間不理想;
低滲溫度過高;
離心速度過高;
固定液加速過快;
固定混勻手法過重;
吹片技術(shù)不良。