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上海金穗生物科技有限公司

與噬菌體展示的多肽反應(yīng)的血清抗體的親和純化

時(shí)間:2013-3-16閱讀:495
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[方法]
1.將4m1包被緩沖液稀釋的PEG純化噬菌體(約1×1011TU/ml)等量分加在聚苯乙烯培養(yǎng)皿中。4℃在搖床上搖動(dòng)過(guò)夜。
2.棄去上清并在室溫下用PBST充分沖洗。
3.加6ml封閉液并在37℃搖床上搖動(dòng)孵育1小時(shí)。
4.在總體積為4ml的封閉液中,將40ul血清與100/xl細(xì)菌提取物和4×1012pfu經(jīng)PEG純化的nRl載體噬菌體混合,并在室溫下孵育60分鐘。
5.棄去封閉液。用PBST快速洗滌。將預(yù)孵育的混合物加到平板上。4℃在搖床上搖動(dòng)過(guò)夜孵育。
6.棄去溶液并在室溫下用PBST充分洗板。
7.除去洗滌緩沖液。加4ml*—HCl/BSA洗脫。室溫下?lián)u床孵育10分鐘。在含有-100ul 2mol/LTris—HCl pH 9.4的聚丙烯管內(nèi)進(jìn)行中和。
8.采用ELISA模式,用純化抗體來(lái)檢測(cè)噬菌體—多肽或抗原。

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