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上海金穗生物科技有限公司

噬菌體展示文庫體內(nèi)及體外篩選器材和試劑

時間:2013-3-14閱讀:657
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● *、外科剪和鑷子各一把
● 幾只特殊品系的小鼠,如BALB/c
● 用10m1的塑料注射器給每只小鼠注射10ml的DMEM培養(yǎng)基或磷酸緩沖液(PBS)。每個注射器附加1英寸(2.54cm)、25號的針。參照Sambtook的方法準(zhǔn)備好如PBS這樣的常用溶液D6]
● 為每只小鼠準(zhǔn)備兩支*
● 為每個器官或組織準(zhǔn)備一個14ml的無菌配衡(tared)塑料管裝
● 為每個器官或組織準(zhǔn)備一個2.2m1的無菌配衡(tared)塑料管裝
● 每個器官或組織中加入約8m1用DMEM或PBS稀釋的1%(w/v)濃度的牛血清白蛋白(BSA)
● 一臺軸長15cm、直徑lcm的手提式勻漿器,或有50gm Medicon和70um Filcon的MediMachine (DAKO’s),每個器官或組織需要Me山con、Filcon、lml緊鎖接口的注射器以及14m1錐形瓶各一個
● 用水配制濃度為1.25%(w/v)的阿佛?。╝vertin)溶液。麻醉劑阿佛丁的制備:將2.5g的2,2,2—三溴乙醇(avertin,A1drich—Sigma Chemical Co.)加入5m1的2—甲基—2—丁醇(叔戊醇) 中,將該溶液置于熱水浴中,直到阿佛丁*溶解,然后加入200ml的MilliQ超純水,制成zui終為濃度1.25%(w/v)。阿佛丁溶液對光和熱敏感,將其裝于紅蓋vacutainner管中,并用鋁箔包好儲存在4℃,這樣可以保持6個月之久。將pH小于5的阿佛丁儲備液丟棄
● 200~500/A1含109~1011個噬菌斑形成單位(pfu)或TU(分別指fUSE5或T7)的噬菌體溶液,如有必要可采用DMEM或PBS作為稀釋劑。
● 超迷離心機(jī),如:EppendOrfe 5415D型離心機(jī)
● 帶擺動吊桶轉(zhuǎn)子的臺式臨床離心機(jī),如帶有GH—3.8轉(zhuǎn)子的Beckman’s Allegra 6R型離心機(jī)
● 帶Sorvall@SLA-3000和SS-34的或同等轉(zhuǎn)子的離心機(jī)
● 400m1的離心管
● 30m1的OakRidge離心管
● 1%的NP—40溶液(用10%的儲備液配制,PierceChelTIicalS)
● 為每份器官或組織準(zhǔn)備一個2.2ml的無菌塑料管
● 無菌刀片
● 為每份器官或組織準(zhǔn)備一個3em的無菌細(xì)胞培養(yǎng)皿
● 為每份器官或組織準(zhǔn)備一個50m1的無菌聚苯乙烯管或聚丙烯管
● 0.5mg/ml細(xì)胞培養(yǎng)基的膠原酶,或是帶50umMedicon的DAKO’s MediMachine。
每份器官或組織需要準(zhǔn)備一個Medicon、一支1ml的luer注射器、一個70gm的F11con和一個14ml的錐形瓶
● 為每份器官或組織準(zhǔn)備一個70um的尼龍細(xì)胞濾網(wǎng)(Falcon釁2350)
● 為每份器官或組織準(zhǔn)備一個1.7ml的無菌塑料管
 

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