方法步驟：
1） 經(jīng)BamHI 及HindIII 作用的pBlueGus 及pQE31，置65℃水浴10 min，移至冰浴降溫后，以含EtBr 的1.0% agarose gel 進(jìn)行電泳。
2） NA 45 以滅過菌的剪刀剪成適當(dāng)大小，置于培養(yǎng)皿中，以10 mM EDTA-8.0浸泡處理10 min，繼以0.5 M NaOH 處理5 min。 以無菌水快速清洗五、六次后，浸泡于無菌水中，置于4℃可保存數(shù)周。
3） 電泳后的膠片以EtBr 染色后，以長波長UV 燈觀察DNA 片段所在位置，并在DNA 色帶前后切一刀，以扁平藥匙輔助將NA 45 插入DNA 前后的切縫中；再以UV 燈觀察NA 45 插入的位置是否恰當(dāng)。
4） 將膠片置回電泳槽中，以100 V 進(jìn)行電泳約10 min （時(shí)間隨NA 45 位置與DNA 距離而定）；以UV 燈觀察DNA 是否*吸附到NA 45。
5） 將NA 45 取出，浸于NET中漂洗以去除附著于NA 45 的膠體 （可用微量移液器頭末端將膠體輕輕去除），再移置于微量離心管中 （每2~3 片置于一管中），吸去多余的液體。
◆ 注意！ 不可讓NA 45 干掉，否則DNA無法被溶離下來。
6） 加入0.3 mL high salt NET，于68℃加熱40 min，其間不時(shí)震蕩。
◆ NA 45 膜片避免重迭在一起，并且必須*浸泡于溶液中。
7） 將溶液吸出，原管中的NA 45 再加入300 μL high salt NET，于68℃加熱10min。
◆ 以下的步驟常容易出錯(cuò)，請(qǐng)務(wù)必分清楚離心后該取上層或下層溶液，請(qǐng)先保留各部份的溶液，確定無誤后再丟棄。
8） 將兩次溶離液合并，加入等體積的n-butanol，震蕩混合，以12,000 rpm 離心5 min。離心后應(yīng)可分為兩層，DNA 溶液在下層。仔細(xì)觀察管底是否有沉淀，吸取下層溶液至另一離心管，避免吸到沉淀。 這時(shí)DNA 溶液體積應(yīng)該減少，可以把兩管或三管的溶液合并成一管。
◆ 溶離后的NA 45 請(qǐng)以UV 照射檢查是否仍有DNA 殘留。
9） 加入等體積的PCI，震蕩混合，以12,000 rpm 離心5 min。
10） 吸取上層水溶液至另一離心管，原管中加入等體積的TE-8.0，混合均勻，以12,000 rpm 離心2 min。將上層液吸出。
11） 合并上層液，加入等體積CI，震蕩混合，以12,000 rpm 離心2 min。
12） 將上層溶液吸出，加入0.2 倍體積的10 M NH4OAc，2.5 倍體積的酒精，置 -20℃沉淀至少 30 min。
13） 以12,000 rpm離心20 min （4℃），沉淀以 -20℃預(yù)冷的70%酒精洗兩次，以同轉(zhuǎn)速離心2 min。
◆ 倒掉上清時(shí)請(qǐng)小心，不要讓沉淀流失！ 沉淀通常很少，且因純度高，沈淀幾近透明，不易察看；上清吸到另一微量試管中暫時(shí)保留。
14） 沉淀干燥后溶于20 μL TE-8.0 中。
15） 取一個(gè)直徑3 cm 的培養(yǎng)皿，加入5 mL TE-8.0。以平端鑷子小心夾取VSWP濾膜，將濾膜的光亮面朝上置于液面上。 將溶離的DNA 溶液加在膜上，靜置透析至少30 min 以去除殘留的鹽。