目前，應(yīng)用zui廣泛的免疫學(xué)方法是酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbentassay，ELISA）。該方法從抗體的包被到酶聯(lián)顯色，都已經(jīng)具備了成熟的技術(shù)，易于制備試劑盒，操作簡(jiǎn)單，特異性好，靈敏度高。   

 

    由于V．p臨床分離株大多為TDH’株，TRH（thermostable related hemolysin）陽(yáng)性株只占10％一15％，少數(shù)為TDH和TRH雙陽(yáng)性，環(huán)境分離株幾乎無(wú)TDH+，所以大多研究者主要選擇TDH、TRH為抗原，制備相應(yīng)的抗體進(jìn)行檢測(cè)。ELISA抗體的包被與固定是關(guān)鍵，影響檢測(cè)的靈敏度和特異性。Honda等設(shè)計(jì)了一種新的固定方法，即用HCl、聚乙烯（p01ythylenceirnine，PEl）、甲基乙烯基馬來(lái)酸酐聚合醚（malwie anhydride methylvinyl ether copolymer，MAMEC）等化學(xué)試劑處理尼龍膜，接著固定包被TDH和TRH的單克隆抗體，然后與V·p培養(yǎng)肉湯中TDH或TRH反應(yīng)15min，洗滌后，與抗TDH、TRH的兔血清多克隆抗體37℃反應(yīng)15min，再與堿性磷酸酶標(biāo)記的抗兔抗體IgG反應(yīng)，zui后底物顯色。結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)緊密相連的三次抗原抗體反應(yīng)，特異性100％，靈敏度95．15％，并且通過(guò)肉眼觀察就能區(qū)分TDH株和TRH株。同時(shí)，該尼龍膜也可以直接用于檢測(cè)糞便標(biāo)本，特異性達(dá)88．9％，靈敏度達(dá)92％，并能在1h內(nèi)完成檢測(cè)。此固定方法減少非特異性吸附，增強(qiáng)抗體結(jié)合度，從而增強(qiáng)了特異性，提高了靈敏度。但是，這種方法涉及抗體包被、固定、抗體的標(biāo)記、顯色等步驟，操作煩瑣，技術(shù)要求高，而且尼龍膜不能長(zhǎng)期保存，不能進(jìn)行大規(guī)模臨床檢測(cè)。同時(shí)，直接檢測(cè)時(shí)，抗原量可能不足，抗原位點(diǎn)也容易改變，導(dǎo)致出現(xiàn)新的血清型，如近年來(lái)出現(xiàn)新的03：K6血清型，zui終造成漏檢。