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上海佰利萊生物科技有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第3年

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佰利萊生物常用方法及原理

時(shí)間:2023/4/11閱讀:76
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佰利萊生物主營(yíng)產(chǎn)品:
1.Elisa試劑盒系列:
ELISA試劑盒在國(guó)內(nèi)有許多種叫法,例如:ELISA檢測(cè)試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見(jiàn)的叫法是ELISA檢測(cè)試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒等。
ELISA試劑盒自從60-70年代問(wèn)世以來(lái),得到眾多科研實(shí)驗(yàn)工作者的認(rèn)可及推崇,在歐美及中國(guó)獲得很大的推廣,尤其是國(guó)內(nèi)生化領(lǐng)域的長(zhǎng)足發(fā)展。
Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。
可檢測(cè)種屬 
(人,小鼠,大鼠,植物,魚(yú),蝦,蟹,牛,羊,狗,貓,微生物,細(xì)胞,土壤等動(dòng)植物)
可以檢測(cè)樣為
(血清,血漿,唾液,尿液,組織,細(xì)胞上清,裂解液等)
產(chǎn)品檢測(cè)目的:
樣本水平表達(dá)(定量檢測(cè),定性檢測(cè),酶活性檢測(cè))
規(guī)格:96T 可以檢測(cè)89個(gè)樣  48T可以檢測(cè)41個(gè)樣
備注:6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)一個(gè)空白對(duì)照
有效期:6個(gè)月 保存2-8°C
佰利萊生物elisa試劑盒的優(yōu)點(diǎn):
一、高效、靈敏、特異的抗體;
二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型;
五、最大限度的節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。
佰利萊生物常用方法及原理如下:
1. 夾心法:
夾心法常用于檢測(cè)大分子抗原,一般的操作步驟為:
a. 將具有專一性的抗體固著(coating)于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體
b. 加入待測(cè)檢體,檢體中若含有待測(cè)的抗原,則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)
c. 洗去多余待測(cè)檢體,加入另一種對(duì)抗原專一的一次抗體,與待測(cè)抗原進(jìn)行鍵結(jié)
d. 洗去多余未鍵結(jié)一次抗體,加入帶有酶的二次抗體,與一次抗體鍵結(jié)
e. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗體,加入酶底物使酵素呈色,以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果

原理:針對(duì)抗原分子上2個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體,將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物。

2. 間接法:

間接法常用于檢測(cè)抗體,一般的操作步驟為:
a. 將已知的抗原固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余的抗原。
b. 加入待測(cè)檢體,檢體中若含有待測(cè)的一次抗體,則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗原進(jìn)行專一性鍵結(jié)。
c. 洗去多余待測(cè)檢體,加入帶有酶的二次抗體,與待測(cè)的一次抗體鍵結(jié)。
d. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗體,加入酶底物使酶呈色,藉儀器(ELISA reader)測(cè)定塑膠盤中的吸光值(OD值),以評(píng)估有色終產(chǎn)物的含量即可測(cè)量待測(cè)抗體的含量。
原理:利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體。
3. 競(jìng)爭(zhēng)法:
競(jìng)爭(zhēng)法是一種較少用到的ELISA檢測(cè)機(jī)制,一般用于檢測(cè)小分子抗原,其操作步驟為:
a. 將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體
b. 加入待測(cè)檢體,使檢體中的待測(cè)抗原與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)
c. 加入帶有酶的抗原,此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié),由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限,因此當(dāng)檢體中抗原的量越多,則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少,亦即,兩種抗原皆競(jìng)相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié),即所謂競(jìng)爭(zhēng)法之由來(lái)。
d. 洗去檢體與帶有酶的抗原,加入酶底物使酶呈色,當(dāng)檢體中抗原量越多,代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酶的抗原越少,顯色也就越淺。
e. 當(dāng)需要偵測(cè)無(wú)法獲得兩種以上單一性抗體的抗原,或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時(shí),一般會(huì)考慮使用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。
原理:將特異性抗體包被于固相載體表面,經(jīng)洗滌后分成兩組:一組加酶標(biāo)記抗原和被測(cè)抗原的混合液,另一組只加酶標(biāo)記抗原,經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色,這兩組底物降解量之差,即為所要測(cè)定的未知抗原的量。


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