產(chǎn)品及特點

膿腫分枝桿菌復合群(Mycobacterium abscessus complex,MABC)是由 膿腫分枝桿菌、 馬賽分枝桿菌和 Mycobacterium bolletii 三種菌組成的復合群, 是可引起人體致病的重要非結核分枝桿菌(NTM)。近年來,NTM 的發(fā)病明顯增多, MABC 起主要貢獻,有許多 MABC 引起散發(fā)感染和院內暴發(fā)感染的報道。MABC 主要侵體肺臟 , 引起 MABC 肺病 ,還可以侵犯肺外組織器官如皮膚和軟組 織、淋巴結、 骨骼、 關節(jié)等 ,甚至引起角膜炎、 心內膜炎等 ,重癥患者可引起全 身播散性疾病、MABC 菌血癥 。MABC 病診斷困難 , 棘手 。 因此快速檢測 膿腫分枝桿菌具有重要的意義。本產(chǎn)品就是以探針法 qPCR 技術為基礎開發(fā)的專 門檢測膿腫分枝桿菌的試劑盒 ,它具有下列特點:

1.    即開即用 ,用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2.    引物和探針經(jīng)過優(yōu)化 ,分析靈敏性高 ,可以達到 100 拷貝/反應。

3.   提供陽性對照 ,便于區(qū)分假陰性樣品。

4.   特異性高 ,  引物是根據(jù)膿腫分枝桿菌 DNA 高度保守區(qū)設計 ,不會跟其他生

物的 DNA 發(fā)生交叉反應。

5.    既可用于定性檢測 ,又可用于定量檢測 。用于定量檢測時線性范圍至少為 5

個數(shù)量級。

6.   本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應。

7.   本產(chǎn)品只能用于科研。

規(guī)格及成分

本產(chǎn)品采用五孔盒包裝

成分

編號

規(guī)格

包裝材料

2 ×Probe qPCR MasterMix

981201

0.5 mL

0.5mL 本色蓋

熒光 PCR 專用模板稀釋液

180701

1 mL

1.5mL 綠蓋管

超純水

210806

1 mL

1.5mL 藍蓋管

qPCR 引物-探針混合液

yp15-67711yc

150 μL

0.5mL 棕色管

膿腫分枝桿菌 qPCR 陽性對照

( 1 × 10E7 拷貝/μL)

pc67711-MW1

47113 1

50 μL

0.5mL 黃蓋管

使用手冊

15-67711sc

1 份

無

運輸及保存

低溫運輸 ,-20℃保存 ,保存期限為 12 個月。

自備試劑

樣品 DNA。

使用方法

一、稀釋標準曲線樣品 (以 10E1- 10E6 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)  。 由于標準品濃度非常高 ,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行 ,千萬不能 污染樣品或本試劑盒的其他成分)  。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原 , 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。

1. 標記 6 個離心管 ,分別為 6 ,5 ,4 ,3 ,2 ,  1。

2.    用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液 , 用帶芯槍頭, 下同)  。

3.   在 6 號管中加入 5 μL 1 × 10E7 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震 蕩 1 分鐘 ,得 1 × 10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品 。放冰上待用。

4.   換槍頭 ,在 5 號管中加入 5 μL 1 × 10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1 × 10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

5.   換槍頭 ,在 4 號管中加入 5 μL 1 × 10E5 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所 得),充分震蕩 1 分鐘,得 1 × 10E4 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品 。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7. 如果有 N 個樣品, 設置 N+2 個提取,多出的一個是 PC (樣品制備陽性 對照)  ,一個是 NC (樣品制備陰性對照)  ?？梢杂?10μL 上步所得 4 號稀

釋液再加上一定量的水使總體積跟核酸制備試劑盒所要求的起始樣本體積 一樣 , 以此作為 PC 。另外用水作為 NC。

8.    用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)樣品 DNA 提取試劑

盒兼容 。也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。

三、Probe qPCR 反應 ( 20μL 體系 ,在樣品制備室進行)

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復 ,則標記 N+9 個 PCR 管 ,其中 N+2 個 用于上步得到的 N+2 個樣品 ,   1 個用于 PCR 陰性對照 (用水做模板)  ,6 個用于標準曲線 。如果做定性分析并且只做 1 次重復 ,則標記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品 ,1 個用于 PCR 陰性對照 (用 水做模板)  ,  1 個用于 PCR 陽性對照 (直接用第 6 步第 4 號管的陽性對照 稀釋液做模板)  。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10. 在標記管中按下表加入各成分 (本表只列出一次重復 。樣品管和陰性對照設 置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好 后 加)  :