哺乳動物細(xì)胞：酶標(biāo)儀（96/384孔板）

       每個細(xì)胞系應(yīng)根據(jù)個體進(jìn)行評估，以確定佳細(xì)胞密度?？梢允褂镁?D賴氨酸板促進(jìn)非貼壁細(xì)胞的細(xì)胞附著。

貼壁細(xì)胞

       將細(xì)胞在生長培養(yǎng)基中過夜。表1提供了每孔細(xì)胞密度的粗略準(zhǔn)則。通常，需要長孵育時間（2-3天）的測定應(yīng)以較低的初始細(xì)胞密度進(jìn)行平板接種。

表1：每個微孔板細(xì)胞密度指南

非貼壁細(xì)胞

1.離心細(xì)胞并小心丟棄上清液（即培養(yǎng)基）。

2.將細(xì)胞沉淀重懸于細(xì)胞生長培養(yǎng)基或HHBS中。表2提供了重懸浮細(xì)胞密度的指南。通常，應(yīng)在較低的初始細(xì)胞密度下重懸需要長孵育時間（2-3天）的測定。

3.將重懸浮的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到測定微孔板中。

4.在實驗之前，以800rpm渦旋微孔板2分鐘。

表2：每個微孔板細(xì)胞密度的指南

哺乳動物細(xì)胞：流式細(xì)胞術(shù)檢測

       每個細(xì)胞系應(yīng)根據(jù)個體進(jìn)行評估，以確定佳細(xì)胞密度。為了從板上分離貼壁細(xì)胞，建議使用0.5 mM EDTA?？梢钥紤]酶試劑（例如胰D白酶，Accutase TM），但需要進(jìn)行測試以確保細(xì)胞表面上的目標(biāo)受體不受影響。

貼壁細(xì)胞

       在使用前在細(xì)胞生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞（400,000至800,000個細(xì)胞/ mL）

非貼壁細(xì)胞

1.離心細(xì)胞并小心丟棄上清液（即培養(yǎng)基）。

2.將細(xì)胞沉淀重懸于 500μL - 1 mL細(xì)胞生長培養(yǎng)基或HHBS中，濃度為500,000至1,000,000細(xì)胞/ mL。

其他細(xì)胞類型：制備和裂解

       以下是制備/裂解植物，細(xì)菌，哺乳動物或組織細(xì)胞樣品的一些通用指南。請注意，應(yīng)根據(jù)個體評估每種細(xì)胞類型，以確定佳細(xì)胞密度和條件。

植物細(xì)胞

1.用裂解緩沖液以200mg / mL均化葉子。

2.以2500rpm離心5-10分鐘。

3.使用上清液進(jìn)行測試。

細(xì)菌細(xì)胞

1.通過離心收集細(xì)菌細(xì)胞（10,000g，0℃，15分鐘）。

2.每100至1000萬個細(xì)胞加入1mL裂解緩沖液，并在室溫下孵育處理過的溶液15分鐘。

3.以2500rpm離心5分鐘。

4.使用上清液進(jìn)行測試。

哺乳動物細(xì)胞

1.從平板孔中取出培養(yǎng)基，每1至5百萬個細(xì)胞（或96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中50-100μL/孔）加入約100μL裂解緩沖液。

2.將處理過的溶液在室溫下孵育15分鐘。

3.直接使用細(xì)胞裂解液或以1500 rpm離心5分鐘，然后使用上清液進(jìn)行測試。

組織

1.稱取約20mg組織并用冷PBS洗滌。

2.在微量離心管中用400μL裂解緩沖液均化。

3.以2500rpm離心5-10分鐘。

4.使用上清液進(jìn)行測定。