哺乳動物細胞：酶標儀（96/384孔板）

       每個細胞系應根據(jù)個體進行評估，以確定佳細胞密度?？梢允褂镁?D賴氨酸板促進非貼壁細胞的細胞附著。

貼壁細胞

       將細胞在生長培養(yǎng)基中過夜。表1提供了每孔細胞密度的粗略準則。通常，需要長孵育時間（2-3天）的測定應以較低的初始細胞密度進行平板接種。

表1：每個微孔板細胞密度指南

非貼壁細胞

1.離心細胞并小心丟棄上清液（即培養(yǎng)基）。

2.將細胞沉淀重懸于細胞生長培養(yǎng)基或HHBS中。表2提供了重懸浮細胞密度的指南。通常，應在較低的初始細胞密度下重懸需要長孵育時間（2-3天）的測定。

3.將重懸浮的細胞轉移到測定微孔板中。

4.在實驗之前，以800rpm渦旋微孔板2分鐘。

表2：每個微孔板細胞密度的指南

哺乳動物細胞：流式細胞術檢測

       每個細胞系應根據(jù)個體進行評估，以確定佳細胞密度。為了從板上分離貼壁細胞，建議使用0.5 mM EDTA。可以考慮酶試劑（例如胰D白酶，Accutase TM），但需要進行測試以確保細胞表面上的目標受體不受影響。

貼壁細胞

       在使用前在細胞生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞（400,000至800,000個細胞/ mL）

非貼壁細胞

1.離心細胞并小心丟棄上清液（即培養(yǎng)基）。

2.將細胞沉淀重懸于 500μL - 1 mL細胞生長培養(yǎng)基或HHBS中，濃度為500,000至1,000,000細胞/ mL。

其他細胞類型：制備和裂解

       以下是制備/裂解植物，細菌，哺乳動物或組織細胞樣品的一些通用指南。請注意，應根據(jù)個體評估每種細胞類型，以確定佳細胞密度和條件。

植物細胞

1.用裂解緩沖液以200mg / mL均化葉子。

2.以2500rpm離心5-10分鐘。

3.使用上清液進行測試。

細菌細胞

1.通過離心收集細菌細胞（10,000g，0℃，15分鐘）。

2.每100至1000萬個細胞加入1mL裂解緩沖液，并在室溫下孵育處理過的溶液15分鐘。

3.以2500rpm離心5分鐘。

4.使用上清液進行測試。

哺乳動物細胞

1.從平板孔中取出培養(yǎng)基，每1至5百萬個細胞（或96孔細胞培養(yǎng)板中50-100μL/孔）加入約100μL裂解緩沖液。

2.將處理過的溶液在室溫下孵育15分鐘。

3.直接使用細胞裂解液或以1500 rpm離心5分鐘，然后使用上清液進行測試。

組織

1.稱取約20mg組織并用冷PBS洗滌。

2.在微量離心管中用400μL裂解緩沖液均化。

3.以2500rpm離心5-10分鐘。

4.使用上清液進行測定。