樣品實驗方案

簡要概述

1. 準備細胞

2. 除去生長培養(yǎng)基

3. 添加Rhod-4 NW染料加載溶液（對于96孔板為100 µL /孔，對于384孔板為25 µL /孔）

4. 在室溫下孵育1小時

5. 檢測Ex / Em = 540/590 nm的熒光強度

溶液配制

儲備溶液配制

1. Rhod-4 NW儲備溶液：將100 µL DMSO加入小瓶Rhod-4 NW（組分A）中并充分混合，避光。 注意：10 µL Rhod-4 NW儲備液足以裝滿一塊板。

2.分析緩沖液（1X）：a）對于＃36330（1個板試劑盒）和＃363331（10個板試劑盒），通過將9 mL HHBS（組分C）添加到10XPluronic®F127 Plus（1 mL，組分B）中來制成1X分析緩沖液，并充分混合。b）對于＃36332（100板試劑盒），通過向10XPluronic®F127 Plus（10 mL，組分B）中加入90 mL HHBS（未包括）制成1X Assay Buffer。 注意：10 mL 1X分析緩沖液足以用于一塊板。 分裝并在<-20℃下存儲未使用的1X分析緩沖液。 避光并避免重復的凍融循環(huán)。

工作溶液配制

Rhod-4 NW工作溶液：將20 µL Rhod-4 NW儲備溶液加入10 mL 1X分析緩沖液中，并充分混合。 注意：該工作溶液在室溫下至少可穩(wěn)定2小時。

實驗步驟

1.將100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Rhod-4 NW染料加載溶液添加到細胞板中。

2.在細胞培養(yǎng)箱中將染料加載板孵育30分鐘，然后在室溫下再孵育30分鐘。 注意：如果測定需要37℃，請立即進行實驗，而無需進一步室溫孵育。 注意：如果細胞在室溫下能長時間正常工作，請在室溫下孵育細胞板1-2小時。

3.準備并添加HHBS或所需緩沖液的復合板。

4.通過檢測Ex / Em = 540/590 nm的熒光強度運行鈣通量檢測。