Amplite 比色法丙an酸轉(zhuǎn)氨酶檢測(cè)試劑盒 是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測(cè)轉(zhuǎn)氨酶的試劑盒，丙*酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT），也稱(chēng)為血清谷*酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶（GPT），是轉(zhuǎn)移酶家族的成員。 它催化丙*酸和谷*酸之間α-氨基的可逆轉(zhuǎn)移，是氨基酸代謝中的重要酶。 ALT主要存在于肝臟中，少量存在于心臟，肌肉和腎臟中。 在健康受試者中，血清ALT水平低。 然而，當(dāng)細(xì)胞受損時(shí)，例如急性和慢性肝炎，阻塞性黃疸，肝癌，心肌梗塞，ALT可能會(huì)滲入血流并且ALT水平顯著升高。 因此，測(cè)定血清ALT水平具有重要的臨床和診斷意義。

Amplite 比色法丙*酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑盒為各種生物樣品中的ALT測(cè)量提供了一種快速而靈敏的方法。 ALT催化丙*酸和α-酮戊二酸與丙酮酸和谷*酸的反應(yīng)：

丙*酸（Ala）+α-酮戊二酸＝丙酮酸+谷*酸（Glu）

通過(guò)酶偶聯(lián)反應(yīng)循環(huán)產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物來(lái)測(cè)量產(chǎn)物谷*酸。 可以通過(guò)吸光度酶標(biāo)儀在~575nm處讀取信號(hào)，或者通過(guò)A570nm至A610nm的吸光度比率來(lái)讀取信號(hào)以提高測(cè)定靈敏度。 使用Amplite 比色法丙*酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測(cè)試劑盒，在100μL反應(yīng)體積中檢測(cè)到少至10 mU / mL的ALT。 該測(cè)定是穩(wěn)健的，并且可以容易地適用于各種各樣的應(yīng)用。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite 比色法丙an酸轉(zhuǎn)氨酶檢測(cè)試劑盒 。

實(shí)驗(yàn)方案

96孔板測(cè)定示例

概述

準(zhǔn)備ALT反應(yīng)混合物（50μL）

加入ALT標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50μL）

孵育于37°C 30分鐘至60分鐘

監(jiān)測(cè)吸光度在575±5 nm處增加或在A570nm / A610nm處的吸光度比率

注意：在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍一個(gè)組分A和B

操作方法

1.準(zhǔn)備ALT標(biāo)準(zhǔn)品的連續(xù)稀釋液（1至1000 mU / mL）：

1.1將100μLDPBS加入ALT陽(yáng)性對(duì)照（組分D）小瓶中，制成100U / mL ALT儲(chǔ)備液。

注意：未使用的ALT原液應(yīng)分成單次使用的等分試樣并儲(chǔ)存在20℃。

1.2將10μL的100 U / mL ALT標(biāo)準(zhǔn)溶液（來(lái)自步驟1.1）加入含有0.1％BSA的990L DPBS緩沖液中，以產(chǎn)生1U / mL ALT標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3取300μL1U/ mL ALT標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋?zhuān)玫?00,100,30,10,3,1和0 mU / mL ALT標(biāo)準(zhǔn)品系列稀釋液。

1.4如說(shuō)明書(shū)中的表1和2中所述，將ALT標(biāo)準(zhǔn)品和含有ALT的測(cè)試樣品的系列稀釋液加入白色/透明底96孔微孔板中。

注意：如果需要，將測(cè)試樣品稀釋至含有0.1％BSA的DPBS緩沖液中的濃度范圍。

2.準(zhǔn)備ALT測(cè)定混合物：

2.1將100μLDdH2O加入到NAD小瓶（組分C）中，得到100X NAD溶液。

2.2將10 mL ALT分析緩沖液（組分B）加入ALT酶混合物瓶中（組分A），并充分混合。

2.3將整瓶100X NAD溶液（來(lái)自步驟2.1）加入ALT酶混合物溶液（來(lái)自步驟2.2）以得到ALT測(cè)定混合物。

注意1：該ALT測(cè)定混合物足以用于兩個(gè)96孔板。在室溫下不穩(wěn)定，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)及時(shí)使用，避免暴露在光線下。

注意2：或者，可以通過(guò)向組分A的瓶中加入200μLH2O制備50X的ALT酶混合物原液，然后通過(guò)將原液與測(cè)定緩沖液（組分B）和100x NAD混合制備ALT測(cè)定混合物。 按比例解決。 將未使用的50X ALT酶混合物原液和100X NAD溶液分裝并儲(chǔ)存在-20℃，避免凍融循環(huán)。

3.運(yùn)行ALT測(cè)定：

3.1將50μLALT測(cè)定混合物（來(lái)自步驟2.3）添加至ALT標(biāo)準(zhǔn)品，空白對(duì)照和測(cè)試樣品（參見(jiàn)步驟1.4）的每個(gè)孔中，以使總ALT測(cè)定體積為100μL/孔。

注意：對(duì)于384孔板，每孔加入25μL樣品和25μLALT測(cè)定混合物。

3.2在37°C下孵育反應(yīng)30分鐘至60分鐘，避光。

注意：空白控制的背景隨著時(shí)間的推移而增加。

3.3使用吸光度讀數(shù)器在575±5 nm或吸光度比率A570nm / A610nm監(jiān)測(cè)吸光度增加，以提高檢測(cè)靈敏度。