PhosphoWorks 發(fā)光法ATP檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測ATP的試劑盒，腺苷三磷酸（ATP）在細(xì)胞能量學(xué)，代謝調(diào)節(jié)和細(xì)胞信號傳導(dǎo)中起重要作用。 PhosphoWorks ATP檢測試劑盒提供快速，簡單和均勻的發(fā)光檢測，用于測定哺乳動物細(xì)胞中的細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性。 可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進(jìn)行測定。 該測定的高靈敏度允許在許多生物系統(tǒng)，環(huán)境樣品和食物中檢測ATP。 這種PhosphoWorks ATP檢測試劑盒具有長達(dá)4小時的穩(wěn)定發(fā)光信號。 它具有穩(wěn)定的發(fā)光，不需要混合或分離，并配制成具有小的手動操作時間。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的PhosphoWorks 發(fā)光法ATP檢測試劑盒。

操作步驟

簡要概述

1.用測試化合物（100μL/ 96孔板或25μL/ 384孔板）制備細(xì)胞（樣品）
2.加入等體積的ATP工作溶液（100μL/ 96孔板或25μL/ 384孔板）
3.在室溫下孵育10-20分鐘
4.監(jiān)測發(fā)光強(qiáng)度

溶液制備

1.將整瓶10 mL反應(yīng)緩沖液（組分C）轉(zhuǎn)移到ATP（組分B）中并充分混合。

2.將20μLATP監(jiān)測酶（組分A）加入到組分B + C的瓶中并充分混合以制備ATP工作溶液。 注意：避免來自外源生物來源的潛在污染。

樣品試驗方案

1運行ATP測定：

1.1用測試化合物處理細(xì)胞（或樣品），在96孔板中加入10μL10X化合物，或在所需化合物緩沖液中加入5μL5X化合物用于384孔板。對于空白孔（沒有細(xì)胞的培養(yǎng)基），加入相應(yīng)量的化合物緩沖液。

1.2將細(xì)胞板在37℃，5％CO 2培養(yǎng)箱中孵育所需的一段時間，例如24,48或96小時。

1.3向每個孔中加入100μL（96孔板）或25μL（384孔板）的ATP工作溶液。

1.4在室溫下孵育10-20分鐘。

1.5用標(biāo)準(zhǔn)發(fā)光計監(jiān)測發(fā)光強(qiáng)度。

2.生成標(biāo)準(zhǔn)ATP校準(zhǔn)曲線：

如果需要計算樣品中ATP的量，則應(yīng)與上述分析一起生成ATP標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.1通過包含不含ATP的樣品（作為對照）用于測量背景發(fā)光，在含有0.1％BSA的PBS緩沖液中制備一系列ATP稀釋液。注意：通常ATP濃度從1 nM到10μM是合適的。

2.2將相同量的稀釋的ATP溶液加入空板中（對于96孔板為100μL或?qū)τ?84孔板為25μL）。

2.3加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的ATP工作溶液。

2.4將反應(yīng)混合物在室溫下孵育10至20分鐘。

2.5用標(biāo)準(zhǔn)光度計監(jiān)測發(fā)光強(qiáng)度。

2.6生成ATP標(biāo)準(zhǔn)曲線。