樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

1.準(zhǔn)備黃P呤標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品（50 µL）
2.添加黃P呤工作溶液（50 µL）
3.在室溫下孵育30-60分鐘
4.OD比為570/610 nm時(shí)讀取吸光度增加

溶液配制

1.儲存溶液配制

所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 Amplite 紅色底物儲備液（250X）：
在Amplite 紅色底物（組分A）的小瓶中加入40 µL DMSO（組分F）。注意：Amplite 紅色底物在硫醇（如二硫蘇糖醇（DTT）和2-巰JI乙醇）的存在下不穩(wěn)定。反應(yīng)中DTT或2-巰JI乙醇的終濃度應(yīng)不高于10 µM。由于Amplite Red的pH不穩(wěn)定> 8.5，因此應(yīng)在pH 7 – 8（建議pH 7.4）下進(jìn)行測定。

1.2 HRP儲備溶液（500X）：
將100 µL測定緩沖液（組分B）加到辣根過氧化物酶（組分C）小瓶中。

1.3 黃P呤氧化酶（XO）儲備溶液（100X）：
向小瓶黃P呤氧化酶標(biāo)準(zhǔn)品（組分E）中添加100 µL測定緩沖液（組分B），制成黃P呤氧化酶（XO）儲備液（100X）。

1.4 黃P呤標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 µM）：
將5 µL黃P呤標(biāo)準(zhǔn)品（組分D）添加到995 µL測定緩沖液（組分B）中，得到100 µM黃P呤標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

黃P呤標(biāo)準(zhǔn)品
用100 µM黃P呤標(biāo)準(zhǔn)溶液（X7）進(jìn)行1：3系列稀釋，以獲得黃P呤標(biāo)準(zhǔn)液（X6-X1）。

3.工作溶液配制

將20μL的Amplite Red底物儲備液（250X），10μL的HRP儲備液（500X）和50μL的黃呤氧化酶儲備液（100X）加入5 mL的測定緩沖液中，使總體積為5.08 mL，避光。