Amplite 比色法丙酮酸檢測(cè)試劑盒是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測(cè)丙酮酸的試劑盒，丙酮酸是細(xì)胞內(nèi)代謝途徑中的重要化合物。它來(lái)源于稱為糖酵解的葡萄糖代謝。一分子葡萄糖分解成兩個(gè)丙酮酸分子，通過(guò)兩種方式之一提供活細(xì)胞能量。當(dāng)氧氣存在時(shí)（有氧呼吸），丙酮酸被丙酮酸脫氫酶轉(zhuǎn)化為乙酰-CoA，丙酮酸脫氫酶進(jìn)入檸檬酸循環(huán)（也稱為三羧酸循環(huán)）產(chǎn)生ATP。當(dāng)氧氣不足時(shí)，丙酮酸鹽會(huì)厭氧分解，在動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生乳酸鹽，在植物和微生物體內(nèi)產(chǎn)生乙醇。丙酮酸鹽的異常水平或乳酸鹽與丙酮酸鹽的濃度比可能與肝臟疾病或代謝紊亂有關(guān)，并且是患者臨床和其他實(shí)驗(yàn)室研究中的一種診斷測(cè)量。 AAT Bioquest的Amplite 熒光丙酮酸鹽檢測(cè)試劑盒提供了一種靈敏的熒光檢測(cè)方法，用于量化生物樣品中的丙酮酸鹽。它利用釋放過(guò)氧化氫的酶偶聯(lián)反應(yīng)，可以在Ex / Em = 540 / 590nm處通過(guò)熒光酶標(biāo)儀中的丙酮酸鹽傳感器檢測(cè)。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite 比色法丙酮酸檢測(cè)試劑盒。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1.準(zhǔn)備樣品以及連續(xù)稀釋的丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（50 µL）
2.加入等體積的工作溶液（50 µL）
3.在室溫下孵育30分鐘至1小時(shí)
4.監(jiān)測(cè)575 nm處的吸光度

溶液制備

1.儲(chǔ)備溶液

所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。 避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. Quest Fluor 丙酮酸傳感器儲(chǔ)備溶液（200X）：
將55 µL DMSO（組分E）添加到Quest Fluor 丙酮酸傳感器（組分A）中，制成200X Quest Fluor 丙酮酸傳感器儲(chǔ)備溶液。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液

丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)
將2μL100 mM丙酮酸鹽（組分D）添加到998μLPBS（pH 7.0）中，得到200μM丙酮酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液（PS7）。 然后執(zhí)行1：2的系列稀釋，以得到剩余的系列稀釋的丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品（PS6-PS1）。

3.工作溶液

將5 mL測(cè)定緩沖液（組分C）添加到一個(gè)Enzyme Mix1瓶（組分B1）中，并充分混合。 將100μLddH2O加入一個(gè)Enzyme Mix2小瓶（組分B2）中并充分混合。 將整個(gè)小瓶的Enzyme Mix2（100μL）和25 uL的200X丙酮酸傳感器儲(chǔ)備溶液轉(zhuǎn)移到Enzyme Mix1瓶中并充分混合。 注意：立即使用，避免直接暴露在光線下。