Amplite 比色法L-乳酸 檢測(cè)試劑盒是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測(cè)乳酸的試劑，乳酸是手性的并且具有兩種光學(xué)異構(gòu)體：L-乳酸和D-乳酸。在代謝和運(yùn)動(dòng)過程中，乳酸鹽通過乳酸脫氫酶（LDH）不斷從丙酮酸產(chǎn)生。 監(jiān)測(cè)乳酸水平是評(píng)估組織需氧量和利用率之間平衡的好方法，在研究細(xì)胞和動(dòng)物生理學(xué)時(shí)非常有用。D-乳酸不被哺乳動(dòng)物代謝，其從體內(nèi)主要取決于腎臟排泄。D-和L-乳酸存在于許多發(fā)酵乳制品中，例如酸奶和奶酪，以及腌制蔬菜，腌制肉類和魚類。D-和L-乳酸含量是食品的質(zhì)量指標(biāo)，如雞蛋，牛奶，果汁和葡萄酒。血液中異常高濃度的D-乳酸通常是胃腸道中過度生長(zhǎng)的反映。

AAT Bioquest的Amplite 乳酸鹽檢測(cè)試劑 L＃乳酸檢測(cè)Cat＃13814和13815，D-lactate檢測(cè)Cat＃13810和13811）提供熒光和吸光度檢測(cè)方法，用于檢測(cè)L-乳酸鹽或D-乳酸鹽。生物樣品，如血清，血漿，尿液，以及細(xì)胞培養(yǎng)樣品。在酶偶聯(lián)測(cè)定中，乳酸與NADH成比例相關(guān)，其通過生色NADH傳感器特異性監(jiān)測(cè)。通過吸光度酶標(biāo)儀在~575nm或~55075nm / A605nm的吸光度比下可以容易地讀取信號(hào)，以提高測(cè)定靈敏度。使用此Colorimetric Amplite L-乳酸 測(cè)定試劑盒，我們能夠在100μL反應(yīng)體積中檢測(cè)到低至4μM的L-乳酸。它應(yīng)用廣泛，可以很容易地適用于需要測(cè)量L-乳酸的各種應(yīng)用。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite 比色法L-乳酸 檢測(cè)試劑盒。

實(shí)驗(yàn)方案

96孔板測(cè)定示例

概述

制備L-乳酸測(cè)定混合物（50μL）

加入L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50μL）

在室溫下孵育30分鐘~2小時(shí)

監(jiān)測(cè)吸光度比率在A575nm / A605nm處增加

注意：在開始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍每個(gè)試劑盒組分中的一個(gè)。

操作方法

1.準(zhǔn)備NAD儲(chǔ)備溶液（100X）：

向NAD小瓶（組分C）中加入100μLH2O，制成100×NAD儲(chǔ)備溶液。

2.準(zhǔn)備L-乳酸鹽儲(chǔ)備液：

將200μLH2 O或1×PBS緩沖液加入L-乳酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品（組分D）的小瓶中以制備100mM D-乳酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液。

注意：未使用的L-lacate標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成單次使用的等分試樣并儲(chǔ)存在-20℃。

3.準(zhǔn)備L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品（0至1 mM）的連續(xù)稀釋液：

3.1將10μLL-乳酸鹽儲(chǔ)備液（來自步驟2）加入990L PBS緩沖液中，以產(chǎn)生1mM L-乳酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液。

注意：稀釋的L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)使用。

3.2取200μL的1mM L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，得到L-Lactate標(biāo)準(zhǔn)品的300,100,30,10,3,1和0μM連續(xù)稀釋液。

3.3如表1和2中所述，將L-乳酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品和含L-乳酸鹽的測(cè)試樣品的系列稀釋液加入白色透明底96孔微孔板中。

4.制備L-乳酸測(cè)定混合物：

4.1將5 mL測(cè)定緩沖液（組分B）加入一瓶酶探針（組分A）中。

4.2將50μLNAD儲(chǔ)備溶液（100X，來自步驟1）加入到組分A的瓶子中（來自步驟4.1），并充分混合。

注意：這種L-乳酸鹽測(cè)定混合物足以用于一個(gè)96孔板。 未使用的L-乳酸鹽測(cè)定混合物應(yīng)分成單次使用的等分試樣并儲(chǔ)存在-20℃。

5.運(yùn)行L-乳酸測(cè)定：

5.1將50μLL-乳酸鹽測(cè)定混合物（來自步驟4.2）添加至L-乳酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品，空白對(duì)照和測(cè)試樣品（參見步驟3.3）的每個(gè)孔中以使得總L-乳酸鹽測(cè)定體積為100μL/孔。

注意：對(duì)于384孔板，在每個(gè)孔中加入25μL樣品和25μLL-乳酸鹽測(cè)定混合物。

5.2在室溫下孵育反應(yīng)30分鐘至2小時(shí)，避光。

5.3用A575nm / A605nm的吸光度讀板儀檢測(cè)吸光度比率的增加。