96孔板測定示例

概述

制備谷*酸測定混合物（50μL）

加入谷*酸標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品（50μL）

在室溫下孵育30分鐘 -  2小時(shí)檢測熒光增加，Ex / Em = 540/590 nm

操作方法

1.準(zhǔn)備NADP儲備液（200X）：

將100μL稀釋緩沖液（組分E）加入到NADP（組分C）的小瓶中以制備200X NADP儲備溶液。

注意：未使用的NADP儲備溶液應(yīng)分成單次使用的等分試樣并儲存在-20℃。

2.準(zhǔn)備谷*酸儲備液：

將200μL稀釋緩沖液（組分E）加入小瓶谷*酸（組分D）中以制備100mM谷*酸儲備溶液。

注意：未使用的谷*酸儲備溶液應(yīng)分成單次使用的等分試樣并儲存于-20℃。

3.準(zhǔn)備谷*酸測定混合物：

3.1將10 mL測定緩沖液（組分B）加入酶混合物瓶（組分A）中。

3.2將50μL200XNADP儲備液（來自步驟1）加入酶混合物瓶（來自步驟3.1），并充分混合。

注意：這種谷*酸測定混合物足以用于兩個(gè)96孔板。 未使用的谷*酸測定混合物應(yīng)分成單次使用的等分試樣并儲存在-20℃。

4.準(zhǔn)備連續(xù)稀釋的谷*酸標(biāo)準(zhǔn)品（0至1 mM）：

4.1將10μL谷*酸儲備溶液（來自步驟2）加入990L稀釋緩沖液（組分E）中以產(chǎn)生1mM谷*酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。

注意：稀釋的谷*酸標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定。 在2小時(shí)內(nèi)使用。

4.2取200μL的1mM谷*酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，得到300,100,30,10,3,1和0μM連續(xù)稀釋的谷*酸標(biāo)準(zhǔn)品。

4.3如說明書中表1和2所述，將連續(xù)稀釋的谷*酸標(biāo)準(zhǔn)品和含有谷*酸的測試樣品加入到96孔板中。

5.運(yùn)行谷*酸測定：

5.1將50μL谷*酸測定混合物（來自步驟3）添加到谷*酸標(biāo)準(zhǔn)品，空白對照和測試樣品的每個(gè)孔中（參見步驟4.3）以使總谷*酸測定體積為100μL/孔。

注意：對于384孔板，每孔加入25μL樣品和25μL谷*酸測定混合物。

5.2在室溫下孵育反應(yīng)30分鐘至2小時(shí)，避光。

5.3通過在Ex / Em = 530-570 / 590-600nm（佳Ex / Em = 540 / 590nm）下使用熒光檢測熒光。

注意：也可以將板中的混合物轉(zhuǎn)移到白色透明底板上，并用吸光度酶標(biāo)儀在576±5nm的波長下讀數(shù)。與熒光讀數(shù)相比，吸收檢測具有較低的靈敏