樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1.在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中制備細(xì)胞
2.用OxiVision 藍(lán)色過氧化物傳感器染色細(xì)胞
3.用測(cè)試化合物處理細(xì)胞
4.用DAPI濾光片或Ex / Em = 405 / 450nm監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度

溶液制備

1.儲(chǔ)備溶液

所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。 避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1. OxiVision 藍(lán)色過氧化物原液（500X）：
將40μLDMSO（組分C）加入到OxiVision 藍(lán)色過氧化物（組分A）的小瓶中并充分混合以制備500X OxiVision 藍(lán)色過氧化物傳感器儲(chǔ)備溶液。 注意：20μL重組的OxiVision 藍(lán)色過氧化物傳感器儲(chǔ)備溶液足以用于1個(gè)平板。 應(yīng)立即使用原液。 避光。

2.工作溶液

將10μL500XOxiVision 藍(lán)色過氧化物儲(chǔ)備溶液加入500μL分析緩沖液（組分B）中，充分混合，制成OxiVision 藍(lán)色過氧化物工作溶液。 注意：此OxiVision 藍(lán)色過氧化物工作溶液不穩(wěn)定; 使用前根據(jù)需要準(zhǔn)備。

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樣品分析

1.添加10μL/孔（96孔板）或2.5μL/孔（384孔板）的OxiVision 藍(lán)色過氧化物工作溶液，每孔90μL細(xì)胞培養(yǎng)物，96孔板或22.5μL細(xì)胞培養(yǎng)物在384孔細(xì)胞板中。注意：染色前無需清洗細(xì)胞。建議在培養(yǎng)基中染色細(xì)胞。

2.用測(cè)試化合物在培養(yǎng)基或37℃的所需緩沖液中處理細(xì)胞一段所需的時(shí)間。對(duì)于對(duì)照樣品（未處理的細(xì)胞），加入相應(yīng)量的化合物緩沖液。注意：建議在培養(yǎng)基中處理細(xì)胞。然而，如果測(cè)試的化合物對(duì)血清敏感，則可以在前吸出生長(zhǎng)培養(yǎng)基和血清因子。抽吸后，將1X Hank鹽溶液和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的緩沖液加入細(xì)胞中?；蛘撸梢栽跓o血清培養(yǎng)基中處理細(xì)胞。我們用培養(yǎng)基中的100μM過氧化氫在37℃處理Jurkat細(xì)胞90分鐘以誘導(dǎo)過氧化氫。詳細(xì)信息請(qǐng)參見圖1。

3.用DPBS洗滌細(xì)胞1-2次，并用100uL /孔（對(duì)于96孔板）或25uL /孔（對(duì)于384孔板）替換測(cè)定緩沖液（組分C）。

4.使用帶DAPI過濾器的熒光顯微鏡拍攝圖像。