樣品實驗方案

簡要概述

1.準(zhǔn)備細(xì)胞進行轉(zhuǎn)染

2.準(zhǔn)備DNA混合物

3.將DNA混合物添加到細(xì)胞培養(yǎng)物中

4.過夜培養(yǎng)

5.用適當(dāng)?shù)姆椒ǚ治鲛D(zhuǎn)染效率

溶液制備

1.工作溶液配制

1.1將2.5ug DNA與200uL無血清培養(yǎng)基混合。

1.2在步驟1中添加7.5 u該試劑。

1.3充分混合并在室溫下孵育20分鐘。 注意：該試劑和DNA的比例需要針對不同的細(xì)胞系進行優(yōu)化，通常：該試劑（uL）與DNA（ug）的比例= 3-5 uL至1ug

6孔板與10cm板樣品方案

樣品示例及操作

1.細(xì)胞培養(yǎng)準(zhǔn)備

1.1轉(zhuǎn)染時將細(xì)胞培養(yǎng)至約90％融合。

1.2轉(zhuǎn)染前用新鮮的生長培養(yǎng)基替換。 例如，對于6孔板，每孔用2 mL培養(yǎng)基替換，對于10 cm板，用6 mL培養(yǎng)基替換。

2.轉(zhuǎn)染方案

將Transfectamine 5000 -DNA混合物添加至培養(yǎng)板并培養(yǎng)過夜。 注意：重組蛋白早可在轉(zhuǎn)染后16小時開始檢測。轉(zhuǎn)染后72?96小時可觀察到大表達水平。