目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測試劑盒>>離子系列>> 組織無機磷含量測試盒微量法
| 貨號 | BK-01S6802 |
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特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱：組織無機磷含量測試盒微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
檢測方法：微量法
產(chǎn)品貨號：BK-01S6802
產(chǎn)品分類：離子系列
商品介紹：
測定意義: 無機磷主要指磷酸根，參與生物體內(nèi)多種代謝，包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質(zhì)磷酸化和脫磷酸化等等，此外促進碳水化合物的合成、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)運。 測定原理： 鉬藍與磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物質(zhì)，通過測定660nm光吸收，即可計算無機磷含量。 自備儀器和用品： 離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗
樣本和試劑浪費！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本： 先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。 |
實驗方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
2 ug pGL4.18[luc2P/Neo] pGL4.18[luc2P/Neo] 低溫運輸，-20℃保存
抗生素檢定 8 號 250g
1瓶 FaDu細胞株 FaDu 低溫運輸和保存
含225ml FB1增菌液均質(zhì)袋 FB1 Broth 10個/包
2000U 綠豆核酸 Mung Bean Nuclease -20℃保存
500mL Potassium Phosphate Solution，0.2M, pH8.0 Potassium Phosphate Solution，0.2M, pH8.0 常溫保存
1Mu G鉀鹽溶液,200mg/mL Penicillin G Potassium 室溫保存,溶液需-20℃保存
2 ug pQCXIH pQCXIH 低溫運輸，-20℃保存
麥芽糖 20支
2 ug pCAT3 control pCAT3 control 低溫運輸，-20℃保存
3%NaCl堿性蛋白胨水 9ml*10支
組織無機磷含量測試盒微量法TRIAD3 鋅指蛋白抑制NFκB蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-MYL(Ser19) 磷酸化肌球蛋白輕鏈2抗體 規(guī)格: 0.1ml
RUBISCO 核酮糖1,5二磷酸羧化抗體 規(guī)格: 0.1mlGalactose kinase/GALK1 半糖激1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-HSP27(Ser78) 磷酸化熱休克蛋白27抗體 規(guī)格: 0.1ml
DDAH-II 雙甲基水解2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Adiponectin Receptor 1 脂聯(lián)素受體1抗體 0.2ml
Fast skeletal Myosin/MRLC2 骨骼肌肌球蛋白輕鏈2抗體 規(guī)格: 0.1ml
DDX4/MVH DDX4抗體 規(guī)格: 0.1ml
FSTL5 卵泡抑素相關(guān)蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-MAP4(Ser1073) 磷酸化微管相關(guān)蛋白4抗體 規(guī)格: 0.1ml
GADD153/CHOP/DDIT3 GADD153抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-CDK2 (Thr14) 磷酸化周期素依賴性激2抗體 規(guī)格: 0.1ml
TSPAN15/NET-7 四分子交聯(lián)體15抗體（四旋蛋白） 規(guī)格: 0.2ml
注意事項：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍？
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時間不夠，可以延長反應(yīng)時間（反應(yīng)時間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通?？梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
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