Protein L Magnetic Beads蛋白L磁珠

Protein L Magnetic Beads是大小均勻的，表面共價(jià)綴合超純的重組蛋白 L（純度> 95％）的二氧化硅基質(zhì)的超順磁珠。與蛋白 A 或蛋白G 磁珠相比，蛋白 L 磁珠可更廣泛的與小鼠、人和大鼠的 Ig 的類(lèi)和亞類(lèi)結(jié)合，使抗體純化更靈活。當(dāng)需要使用的一級(jí)抗體選定時(shí)， 此磁珠在免疫沉淀和細(xì)胞分選中特別適用。該磁珠還可用于從幾種物種的血清樣本、腹水液、血漿或組織培養(yǎng)上清液中快速高效地一步純化抗體。表 1 總結(jié)了蛋白 L 對(duì)不同抗體的結(jié)合特異性。

產(chǎn)品特點(diǎn)： 

·適用于快捷，簡(jiǎn)便的一步高通量程序，無(wú)需純化柱或過(guò)濾器，或者重復(fù)的移液或離心(Fig.1)

·由于磁珠的親水性表面，非特異性結(jié)合率極低

·結(jié)合容量

·對(duì)樣本體積要求低，便于自動(dòng)化操作

·性價(jià)比高

產(chǎn)品屬性：

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緩沖液成分：

·Protein L Beads (懸浮在 10 mM Tris, 0.15 M NaCl, 0.1% BSA,1 mM EDTA, pH7.4, 0.1% NaN3 緩沖液中)

·1x Binding/Washing Buffer (0.1 M 磷酸鈉，0.15 M 氯化鈉, pH 7.2)

·1x Elution Buffer (0.2 M Glycine/HCl,pH 2.5)

·1x Neutralization Buffer (1.0 M Tris-HCl, pH 9.0)

·Storage buffer (10 mM Tris, 0.15 M NaCl, 0.1% BSA,1 mM EDTA, pH 7.4, 0.1% NaN3)

所需耗材：

磁力分離器（適用于手動(dòng)操作）：根據(jù)實(shí)驗(yàn)時(shí)生物

一、模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物，分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為T(mén)A克隆等過(guò)程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥(niǎo)苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂、DNA合成         等生物學(xué)過(guò)程，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類(lèi)的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴(kuò)增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；

六、酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)步驟，常常需要進(jìn)行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來(lái)判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時(shí)，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長(zhǎng)鏈甚至全長(zhǎng)mRNA的RT，對(duì)RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進(jìn)行RT反應(yīng)，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機(jī)引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機(jī)引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個(gè)gene表達(dá)量很低）。選擇隨機(jī)引物時(shí)，鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行特異性擴(kuò)增。同時(shí)要注意隨機(jī)引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量超過(guò)250ng，可能會(huì)導(dǎo)致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長(zhǎng)片段、全長(zhǎng)產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個(gè)基因序列的一部分，與模板互補(bǔ)的引物。該引物需要結(jié)合目標(biāo)RNA的已知序列進(jìn)行設(shè)計(jì)。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個(gè)目標(biāo)RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當(dāng)分析多種目標(biāo)時(shí)，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來(lái)就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對(duì)退火溫度進(jìn)行優(yōu)化。