Uracil-DNA Glycosylase UDG酶

儲存條件：-20℃保存

產(chǎn)品說明：

Uracil-DNA Glycosylase(UDG 酶)來源于大腸桿菌表達(dá)的重組大腸桿菌尿mi啶-DNA糖基化酶，可催化含尿mi啶(U)的 DNA 釋放游離的尿mi啶，對 RNA 無活性。UDG酶能有效水解單鏈或雙鏈 DNA 中的尿mi啶，但不能水解小于6bp的寡脫氧核苷酸中的尿mi啶。UDG 酶主要用于防止或清除 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。其作用原理是在 PCR反應(yīng)中以 dUTP替代 dTTP 摻入 DNA 中形成含 dU 堿基的 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物，此擴(kuò)增 DNA 產(chǎn)物中 dU 堿基的糖苷鍵被 UDG酶切掉生成無嘧啶位點(diǎn)，失去 dU 堿基處極不穩(wěn)定，在隨后的加熱步驟中DNA被斷裂降解。

來源：基因工程大腸桿菌表達(dá)的大腸桿菌UDG重組酶。

活性單位：1活性單位(U)是指在 50 μL 反應(yīng)體系中, 37°C 30 min 內(nèi),每分鐘從0.2 μg含尿mi啶的DNA中釋放60 pmol尿mi啶所需的酶量。 

質(zhì)量控制：SDS-PAGE 檢測純度大于99%，經(jīng)檢測無核酸外切酶，內(nèi)切酶活性，無核糖核酸酶活性，無細(xì)菌基因組DNA殘留。

應(yīng)用范圍：

1.核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)中擴(kuò)增產(chǎn)物污染的預(yù)防與清除。

2.DNA中去除尿mi啶堿基。

儲存緩沖液：10 mM Tris-HCl，50 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol， pH 7.5 @ 25°C。

一、模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應(yīng)的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂、DNA合成         等生物學(xué)過程，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴(kuò)增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；

六、酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實(shí)驗(yàn)步驟，常常需要進(jìn)行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT，對RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進(jìn)行RT反應(yīng)，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機(jī)引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機(jī)引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個gene表達(dá)量很低）。選擇隨機(jī)引物時，鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進(jìn)行PCR反應(yīng)時設(shè)計引物進(jìn)行特異性擴(kuò)增。同時要注意隨機(jī)引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量超過250ng，可能會導(dǎo)致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長片段、全長產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個基因序列的一部分，與模板互補(bǔ)的引物。該引物需要結(jié)合目標(biāo)RNA的已知序列進(jìn)行設(shè)計。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個目標(biāo)RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當(dāng)分析多種目標(biāo)時，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對退火溫度進(jìn)行優(yōu)化。